Question

19．科研人員利用胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）對(duì)干擾素基因缺失小鼠進(jìn)行基因治療．其技術(shù)流程如圖1：

（1）步驟①的技術(shù)名稱是細(xì)胞核．
（2）將基因?qū)�入ES細(xì)胞而不是導(dǎo)入到上皮細(xì)胞是因?yàn)镋S細(xì)胞具有ES細(xì)胞具有全能性．
（3）步驟③中，需要構(gòu)建含有干擾素基因的基因表達(dá)載體．由于DNA復(fù)制時(shí)，子鏈只能由5′向3′方向延伸，故構(gòu)建前利用PCR技術(shù)擴(kuò)增干擾素基因時(shí)，可以從圖2A、B、C、D四種單鏈DNA片段中選取B和C作為引物．對(duì)干擾素基因片段和質(zhì)粒進(jìn)行酶切時(shí)，可選用限制酶的組合為HindⅢ和PstⅠ或EcoRⅠ和PstⅠ．
（4）將步驟③獲得的ES細(xì)胞在熒光顯微鏡下觀察，選擇發(fā)綠色熒光的細(xì)胞進(jìn)行體外誘導(dǎo)．為檢測干擾素基因是否表達(dá)，可以采用抗原-抗體雜交的方法．

Answer 1

分析 分析圖1：①表示核移植過程；②表示早期胚胎培養(yǎng)過程；③表示將目的基因?qū)�入ES細(xì)胞．
分析圖2：該DNA片段含有四種限制酶識(shí)別序列和切割位點(diǎn)，其中SamⅠ酶的識(shí)別序列和切割位點(diǎn)位于目的基因上．
分析圖3：圖3為質(zhì)粒結(jié)構(gòu)示意圖，該質(zhì)粒含有2個(gè)標(biāo)記基因（紅色熒光標(biāo)記基因和綠色熒光標(biāo)記基因）．

解答 解：（1）核移植是將體細(xì)胞核移植到去核的卵母細(xì)胞中，所以實(shí)驗(yàn)前要去除卵母細(xì)胞的細(xì)胞核．
（2）將基因?qū)�入ES細(xì)胞而不是導(dǎo)入到上皮細(xì)胞是因?yàn)镋S細(xì)胞具有全能性．
（3）步驟③是將目的基因?qū)�入ES細(xì)胞，該過程之前需要構(gòu)建基因表達(dá)載體；DNA復(fù)制只能從5’到3’，因此構(gòu)建前利用PCR技術(shù)擴(kuò)增干擾素基因時(shí)，可以從圖2中A、B、C、D四種單鏈DNA片段中選取B和C作為引物．由圖可知，SamⅠ酶的識(shí)別序列和切割位點(diǎn)位于目的基因上，用該酶切割會(huì)破壞目的基因，因此對(duì)干擾素基因片段和質(zhì)粒進(jìn)行酶切時(shí)，可選用限制酶HindⅢ和PstⅠ或EcoRⅠ和PstⅠ．
（4）用限制酶HindⅢ和PstⅠ或EcoRⅠ和PstⅠ切割時(shí)會(huì)破壞紅色熒光蛋白基因，但不會(huì)破壞綠色熒光蛋白基因，因此將步驟③獲得的ES細(xì)胞在熒光顯微鏡下觀察，選擇發(fā)綠色熒光的細(xì)胞進(jìn)行體外誘導(dǎo)．為檢測干擾素基因是否表達(dá)，可以采用抗原-抗體雜交法．
故答案為：
（1）細(xì)胞核
（2）ES細(xì)胞具有全能性
（3）基因表達(dá)載體   B和C    HindⅢ和PstⅠEcoRⅠ和PstⅠ
（4）綠   抗原-抗體雜交

點(diǎn)評(píng) 本題以基因治療的流程圖為載體，考查了基因工程、細(xì)胞工程以及胚胎工程等方面的知識(shí)，難度適中．考生要能夠識(shí)記細(xì)胞核移植的過程；識(shí)記囊胚包括內(nèi)細(xì)胞團(tuán)和滋養(yǎng)層兩部分；明確基因工程中質(zhì)粒和目的基因需要利用同種限制酶進(jìn)行切割；掌握目的基因檢測和鑒定的一般方法等．