Question

16．下面表示科學(xué)家培育耐寒生物的過程，請回答：
cDNA文庫$\stackrel{獲取}{→}$抗凍蛋白基因$\stackrel{①}{→}$更多抗凍蛋白基因$\stackrel{構(gòu)建}{→}$②$\stackrel{導(dǎo)入}{→}$受體細(xì)胞→耐寒生物
（1）從cDNA文庫中獲取的目的基因無（有/無）啟動子．實現(xiàn)①過程常用PCR技術(shù)擴(kuò)增．該技術(shù)的原理是DNA的雙鏈復(fù)制．在PCR反應(yīng)體系中應(yīng)含有擴(kuò)增緩沖液、4種原料、模板DNA、引物及熱穩(wěn)定DNA聚合酶（TaqDNA聚合酶）．
（2）②表示基因表達(dá)載體，其中標(biāo)記基因的作用是鑒別受體細(xì)胞中是否含有目的基因．
（3）若要培育抗凍能力強(qiáng)的轉(zhuǎn)基因羊，可將魚的抗凍蛋白基因?qū)�入羊的受精卵中，該過程常用的方法是顯微注射法，培育該轉(zhuǎn)基因羊的最后一道“工序”是胚胎工程的胚胎移植技術(shù)．

Answer 1

分析 基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成．
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動子、終止子和標(biāo)記基因等．
（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入動物�?xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法．
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）用某種生物發(fā)育的某個時期的mRNA反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的多種互補(bǔ)DNA片段，與載體連接后儲存在一個受體菌群中，這個受體菌群就叫這種生物的cDNA文庫，由于啟動子不能轉(zhuǎn)錄，因此逆轉(zhuǎn)錄形成的cDNA中沒有啟動子；PCR的原理是DNA的雙鏈復(fù)制；PCR是在較高溫度下進(jìn)行的，因此需要熱穩(wěn)定DNA聚合酶．
（2）②表示基因表達(dá)載體，其中標(biāo)記基因的作用是為了鑒別受體細(xì)胞中是否含有目的基因．
（3）培育轉(zhuǎn)基因動物時，常以受精卵作為受體細(xì)胞，因為受精卵的全能性最高；將目的基因?qū)�入動物�?xì)胞最有效的方法是顯微注射法；培育該轉(zhuǎn)基因動物的最后一道“工序”是胚胎移植．
故答案為：
（1）無       DNA的雙鏈復(fù)制    熱穩(wěn)定DNA聚合酶（TaqDNA聚合酶）
（2）基因表達(dá)載體    鑒別受體細(xì)胞中是否含有目的基因
（3）受精卵   顯微注射法    胚胎移植

點評 本題結(jié)合圖解，考查基因工程的相關(guān)知識，要求考生識記基因工程的原理及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細(xì)節(jié)，能結(jié)合所學(xué)的知識準(zhǔn)確答題．