Question

16．如圖為培育轉(zhuǎn)基因奶牛獲得人血清白蛋白（HSA）的流程．回答下列問題：

（1）PCR擴增HSA基因使用的酶是熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Taq酶、耐高溫DNA聚合酶），構(gòu)建含有人HSA基因表達載體時所用的工具酶有限制酶和DNA連接酶．
（2）圖中培育轉(zhuǎn)基因動物屬于有性（填“有性”“無性”）繁殖，過程①常用的方法是顯微注射法．在過程②進行之前，需對早期胚胎進行性別鑒定，可取胚胎細胞進行DNA分析，其采用的基因探針來
自性（填“�！薄靶浴保┤旧�體．
（3）檢測牛奶中是否含有人血清白蛋白，可采用抗原-抗體雜交技術(shù)，但在轉(zhuǎn)基因牛乳汁中卻沒有檢測到HSA的存在，若從構(gòu)建基因表達載體的角度分析，最可能的原因是位于目的基因前后的啟動子和終止子設(shè)計不理想，導致目的基因不能進行表達．

Answer 1

分析 基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴增和人工合成．
（2）基因表達載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等．
（3）將目的基因?qū)�入受體細胞：根據(jù)受體細胞不同，導入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物細胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法．
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）PCR技術(shù)是在較高溫度下進行的，因此需要使用熱穩(wěn)定DNA聚合酶；構(gòu)建基因表達載體時，首先需要用限制面前切割含有目的基因的外源DNA和運載體，其次需要用DNA連接酶將目的基因與運載體連接形成重組DNA．
（2）圖中培育轉(zhuǎn)基因動物時經(jīng)過體外受精，因此屬于有性繁殖；將目的基因?qū)�入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；在過程②進行之前，需對早期胚胎進行性別鑒定，可取胚胎細胞進行DNA分析，其采用的基因探針來自性染色體．
（3）檢測目的基因是否表達產(chǎn)生相應(yīng)的蛋白質(zhì)可采用抗原-抗體雜交技術(shù)．目的基因的正常表達離不開啟動子和終止子，若在轉(zhuǎn)基因牛乳汁中卻沒有檢測到HSA的存在，從構(gòu)建基因表達載體的角度分析，最可能的原因是位于目的基因前后的啟動子和終止子設(shè)計不理想，導致目的基因不能進行表達．
故答案為：
（1）熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Taq酶、耐高溫DNA聚合酶）      限制酶和DNA連接酶
（2）有性     顯微注射法     性
（3）抗原-抗體雜交     位于目的基因前后的啟動子和終止子設(shè)計不理想，導致目的基因不能進行表達

點評 本題考查基因工程的相關(guān)知識，要求考生識記基因工程的原理、操作工具及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細節(jié)，能結(jié)合所學的知識準確答題．