Question

15．絞股藍(lán)細(xì)胞中含有抗煙草花葉病毒（TMV）基因，可以合成一種抗TMV 蛋白，葉片對(duì)TMV 具有抗感染性．煙草是具有重要經(jīng)濟(jì)價(jià)值的雙子葉植物，由于TMV 的感染會(huì)導(dǎo)致大幅度減產(chǎn)．研究人員利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)培育出了抗TMV 的煙草，主要流程如圖所示．

（1）理論上，基因組文庫(kù)含有生物的全部基因；而cDNA 文庫(kù)中含有生物的部分基因．
（2）科學(xué)家從絞股藍(lán)細(xì)胞中提取抗TMV 基因轉(zhuǎn)錄的RNA，然后合成目的基因．圖中①過(guò)程表示反轉(zhuǎn)錄．
（3）④過(guò)程將重組Ti 質(zhì)粒導(dǎo)入煙草體細(xì)胞的常用方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法．
（4）由圖分析，在過(guò)程③構(gòu)建的重組Ti 質(zhì)粒上應(yīng)該含有的標(biāo)記基因是卡那霉素抗性基因，它的作用是具有鑒定和篩選導(dǎo)入目的基因成功的受體細(xì)胞的作用．
（5）過(guò)程⑥可采取抗原-抗體雜交的方法，檢測(cè)植株是否合成了抗TMV 蛋白．在個(gè)體水平的鑒定過(guò)程中，可通過(guò)接種煙草花葉病毒的方法來(lái)確定植株是否具有抗性．

Answer 1

分析 1、基因文庫(kù)是指將含有某種生物不同基因的許多DNA片段，導(dǎo)入到受體菌的群體中儲(chǔ)存，各個(gè)受體菌分別含有這種生物的不同基因．
基因組文庫(kù)包含某種生物所有的基因；部分基因文庫(kù)包含某種生物的部分基因．如：cDNA文庫(kù)．
2、將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法．
3、目的基因的檢測(cè)與鑒定：（1）分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．（2）個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲(chóng)鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）基因組文庫(kù)含有某種生物的全部基因；cDNA文庫(kù)中只含有該種生物的部分基因．
（2）過(guò)程①表示獲得的目的基因，是RNA通過(guò)反轉(zhuǎn)錄獲得DNA．
（3）將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的常用的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法．
（4）過(guò)程⑤添加卡那霉素的作用是篩選含有目的基因的重組質(zhì)粒．可推知過(guò)程③構(gòu)建的重組Ti 質(zhì)粒上應(yīng)該含有的標(biāo)記基因是卡那霉素抗性基因，具有鑒定和篩選導(dǎo)入目的基因成功的受體細(xì)胞．
（5）過(guò)程⑥需要對(duì)表達(dá)的產(chǎn)生進(jìn)行鑒定，可采取抗原-抗體雜交，可檢測(cè)植株是否合成了抗TMV蛋白；若從個(gè)體水平鑒定，可通過(guò)接種煙草花葉病毒的方法來(lái)確定植株是否具有抗性．
故答案為：
（1）全部  部分    
（2）反轉(zhuǎn)錄     
（3）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法
（4）卡那霉素抗性      鑒定和篩選導(dǎo)入目的基因成功的受體細(xì)胞
（5）抗原-抗體雜交     接種煙草花葉病毒

點(diǎn)評(píng) 本題考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因文庫(kù)的種類(lèi)，掌握兩種基因文庫(kù)的區(qū)別；識(shí)記PCR技術(shù)的條件；識(shí)記基因工程的具體操作步驟及相關(guān)細(xì)節(jié)，能結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確答題．