Question

7．酸奶是以牛奶為原料，經過巴氏殺菌后再向牛奶中添加有益菌，經發(fā)酵制成．家庭自制酸奶的安全隱患是有害菌污染問題，為檢測自制酸奶是否被雜菌污染，進行如圖所示操作．回答下列問題．
（1）制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，倒平板待其冷卻后將平板倒置的主要原因是防止冷凝水污染培養(yǎng)基．
（2）取最終的牛奶稀釋液0.1mL滴在培養(yǎng)基上進行涂布，涂布前要將涂布器灼燒冷卻后才能涂布．如果培養(yǎng)基上出現（形狀、大小、顏色、光澤度）不同的菌落，說明自制酸奶已被雜菌污染．
（3）在恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一段時間后，3個平板上菌落數分別為65個、63個、64個，則可以推測酸奶中每毫升含菌數為6.4×10⁸個．運用這種方法統計的結果往往較實際值偏小，原因是有的菌落可能是由2個或多個菌體形成的．
（4）已知酸奶中的有益菌主要是乳酸菌，進一步分離純化乳酸菌的方法是挑取乳酸菌菌落在無菌的條件下繼續(xù)進行培養(yǎng)，該操作中常使用的接種工具是接種環(huán)．若培養(yǎng)后獲得的某個平板，第一劃線區(qū)域的劃線上都不間斷地長滿了菌落，第二劃線區(qū)域所劃的第一條線上無菌落，其他劃線上有菌落，造成第一條線上無菌落的可能操作失誤有接種環(huán)灼燒后未冷卻、未從第一區(qū)域末端開始劃線．

Answer 1

分析 1、配制牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的注意事項
①倒平板的溫 度一般50℃左右適宜，溫度過高會燙手，過低培養(yǎng)基又會凝固；
②平板需倒置，這樣既可使培養(yǎng)基表面的水分更好地揮發(fā)，又可防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染．
2、平板劃線操作的注意事項
①第一次劃線及每次劃線之前都需要灼燒接種環(huán)滅菌；
②灼燒接種環(huán)之后，要冷卻后才能伸入菌液，以免溫度太高殺死菌種；
③劃線時最后一區(qū)域不要與第一區(qū)域相連；
④劃線用力大小要適當，防止用力過大將培養(yǎng)基劃破．

解答 解：（1）制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，平板需倒置，這樣既可使培養(yǎng)基表面的水分更好地揮發(fā)，又可防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染．
（2）稀釋涂布平板法中，為了防止雜菌的污染，涂布前要將涂布器灼燒冷卻后才能涂布．如果培養(yǎng)基上出現形狀、大小、顏色、光澤度等不同的菌落，說明自制酸奶已被雜菌污染．
（3）分析圖解可知，酸奶稀釋了10⁶倍，在恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一段時間后，3個平板上菌落數分別為65個、63個、64個，則可以推測酸奶中每毫升含菌數為=（65+63+64）÷3÷0.1×10⁶=6.4×10⁸個．由于有的菌落可能是由2個或多個菌體形成的，因此運用這種方法統計的結果往往較實際值偏小．
（4）已知酸奶中的有益菌主要是乳酸菌，進一步分離純化乳酸菌的方法是挑取乳酸菌菌落在無菌的條件下繼續(xù)進行培養(yǎng)，該操作中常使用的接種工具是接種環(huán)．若培養(yǎng)后獲得的某個平板，第一劃線區(qū)域的劃線上都不間斷地長滿了菌落，第二劃線區(qū)域所劃的第一條線上無菌落，其他劃線上有菌落，造成第一條線上無菌落的可能操作失誤有接種環(huán)灼燒后未冷卻、未從第一區(qū)域末端開始劃線．
故答案為：
（1）防止冷凝水污染培養(yǎng)基
（2）灼燒冷卻后�。ㄐ螤�、大小、顏色、光澤度）不同
（3）6.4×10⁸　有的菌落可能是由2個或多個菌體形成的
（4）挑取乳酸菌菌落在無菌的條件下繼續(xù)進行培養(yǎng)　接種環(huán)　接種環(huán)灼燒后未冷卻　未從第一區(qū)域末端開始劃線

點評 本題考查了微生物的分離與培養(yǎng)的有關知識，要求考生識記配制牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的過程和相關注意點，掌握平板劃線法的操作步驟并能夠對異常實驗結果進行原因分析．