Question

13．EPO是促紅細(xì)胞生成素（Erythropoietin）的英文簡(jiǎn)稱，是一種激素樣物質(zhì)，可促進(jìn)體內(nèi)新紅細(xì)胞生成．人類已可通過(guò)基因工程合成EPO基因，并采用中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢（CHO）細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)來(lái)獲取產(chǎn)物．其過(guò)程如下：請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

（1）從人體組織中提取EPO的mRNA，通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄得到單鏈DNA，再通過(guò)PCR技術(shù)獲得大量EPO基因．
（2）從供體母鼠的卵巢中獲取的卵子需要在體外培養(yǎng)到減數(shù)第二次分裂中期期才能與獲能的精子受精，受精作用完成的標(biāo)志是雌雄原核融合．
（3）①過(guò)程構(gòu)建了基因表達(dá)載體，內(nèi)部包括多個(gè)不可缺少的組成部分，其中啟動(dòng)子能驅(qū)動(dòng)基因的轉(zhuǎn)錄．
（4）采用顯微注射技術(shù)，將重組表達(dá)載體導(dǎo)入小鼠受精卵中，然后將受精卵移入發(fā)育培養(yǎng)液中繼續(xù)培養(yǎng)，當(dāng)胚胎發(fā)育至桑椹胚或囊胚期，向受體母牛進(jìn)行移植．此外，移植前需對(duì)已成功轉(zhuǎn)入目的基因的胚胎進(jìn)行性別鑒定．
（5）若想檢驗(yàn)轉(zhuǎn)基因倉(cāng)鼠是否成功表達(dá)EPO，可以采用抗原-抗體雜交技術(shù)對(duì)血液來(lái)進(jìn)行檢測(cè)．

Answer 1

分析 基因工程技術(shù)的基本步驟：
1、目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫(kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成．
2、基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等．
3、將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法．
4、目的基因的檢測(cè)與鑒定：（1）分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．（2）個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）獲取目的基因的方法可通過(guò)反轉(zhuǎn)錄法，故從人體組織中提取EPO的mRNA，通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄得到cDNA，再通過(guò)PCR技術(shù)獲得大量EPO基因．
（2）卵子需培養(yǎng)到減數(shù)第二次分裂中期時(shí)才能與獲能的精子受精．受精作用完成的標(biāo)志是雌雄原核融合．
（3）①過(guò)程為形成基因表達(dá)載體的過(guò)程，基因表達(dá)載體包括啟動(dòng)子、終止子等，其中啟動(dòng)子為RNA聚合酶結(jié)合的部位，能驅(qū)動(dòng)基因的轉(zhuǎn)錄．
（4）將重組表達(dá)載體導(dǎo)入動(dòng)物細(xì)胞中常采用顯微注射技術(shù)技術(shù)．胚胎移植時(shí)應(yīng)該選擇桑椹胚或囊胚進(jìn)行移植．動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)液成分除一些無(wú)機(jī)鹽和有機(jī)鹽類外，還需添加維生素、激素、氨基酸、核苷酸等營(yíng)養(yǎng)成分，以及血清（血漿）等物質(zhì)．由于是采用中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢（CHO）細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)來(lái)獲取產(chǎn)物，因此移植前需對(duì)已成功轉(zhuǎn)入目的基因的胚胎進(jìn)行性別鑒定．
（5）檢測(cè)目的基因是否表達(dá)應(yīng)該采用抗原-抗體雜交技術(shù)．
故答案為：
（1）逆轉(zhuǎn)錄
（2）減數(shù)第二次分裂中期    獲能    雌雄原核融合
（3）啟動(dòng)子
（4）顯微注射  桑椹胚或囊胚   性別鑒定
（5）抗原-抗體雜交

點(diǎn)評(píng) 本題以“促紅細(xì)胞生成素”的合成為題材，考查基因工程和植物細(xì)胞工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的原理及操作步驟，識(shí)記植物組織培養(yǎng)的原理及應(yīng)用，能結(jié)合題中信息準(zhǔn)確答題．