Question

9．蛋白酶在生物醫(yī)藥和日用化工等生產(chǎn)領(lǐng)域具有重要的經(jīng)濟價值．某同學(xué)為篩選產(chǎn)蛋白酶的高產(chǎn)菌株，做了如下實驗步驟（配置了下列培養(yǎng)基，在適宜條件下培養(yǎng)）：

步驟	取樣	培養(yǎng)基	培養(yǎng)結(jié)果
Ⅰ	土壤樣品	葡萄糖，（NH4）2SO4，K2HPO4•3H2O，KH2PO4，NaCl，CaCl2， MgSO4•7H2O，加水定容	培養(yǎng)液a
Ⅱ	1mL培養(yǎng)液a	同上	菌落
Ⅲ	挑取單菌落	細(xì)菌培養(yǎng)基	培養(yǎng)液b

（1）為實現(xiàn)篩選目的，步驟Ⅰ所使用的培養(yǎng)基配方中，應(yīng)去除（NH₄）₂SO₄ 并加入高濃度的蛋白質(zhì)．
（2）為實現(xiàn)目的菌的分離和計數(shù)，步驟Ⅱ所使用的培養(yǎng)基中還應(yīng)加入瓊脂制成平板，采用的接種方法是稀釋涂布平板法，實驗結(jié)果如圖A．
（3）步驟Ⅲ應(yīng)挑取圖A中a處的菌落，本步驟的目的是快速增加目的菌的種群數(shù)量（擴大培養(yǎng)）．

（4）圖B是該蛋白酶和其它酶的熱穩(wěn)定性數(shù)據(jù)，即酶在不同溫度下保溫足夠長的時間，再在酶活性最高的溫度下測其酶活性．在該蛋白酶的工業(yè)化生產(chǎn)過程中，通常需對發(fā)酵液在60-70℃保溫一定時間的，其作用是大幅度降低發(fā)酵液中其他酶的活性．

Answer 1

分析 1、微生物培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無機鹽，此外還要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求．對異養(yǎng)微生物來說，含C、N的化合物既是碳源，也是氮源，即有些化合物作為營養(yǎng)要素成分時并不是起單一方面的作用．
2、微生物常見的接種的方法
①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)．在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個菌落．
②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個菌落．

解答 解：（1）分析題意可知，實驗?zāi)康氖恰昂Y選產(chǎn)蛋白酶的高產(chǎn)菌株”，因此為實現(xiàn)篩選目的，步驟Ⅰ所使用的培養(yǎng)基配方中，應(yīng)去除 （NH₄）₂SO₄ 并加入高濃度的蛋白質(zhì)即以蛋白質(zhì)作為唯一氮源．
（2）為實現(xiàn)目的菌的分離和計數(shù)，培養(yǎng)基應(yīng)選擇固體培養(yǎng)基，固體培養(yǎng)基需要加入瓊脂作為凝固劑；分析圖A可知，培養(yǎng)基中的菌落均勻分布，因此采用的接種方法是稀釋涂布平板法．
（3）根據(jù)題意和圖A分析可知：a周圍的透明圈最大，說明分泌的蛋白酶最多，所以大規(guī)模產(chǎn)業(yè)化首選的菌株是a．本步驟的目的是快速增加目的菌的種群數(shù)量（擴大培養(yǎng)）．
（4）根據(jù)題意和圖B分析可知：在60～70℃時，其它酶的相對活性明顯比蛋白酶的相對活性低，所以保溫一定時間的作用是大幅度降低發(fā)酵液中其他酶的活性．
故答案為：
（1）（NH₄）₂SO₄    蛋白質(zhì)
（2）瓊脂       稀釋涂布平板法
（3）a       快速增加目的菌的種群數(shù)量（擴大培養(yǎng)）
（4）大幅度降低發(fā)酵液中其他酶的活性

點評 本題考查微生物分離和培養(yǎng)的相關(guān)知識，要求考生能夠掌握選擇培養(yǎng)基作用的原理，識記培養(yǎng)基的成分、類型、功能等，根據(jù)菌落產(chǎn)生的透明圈的大小判斷目標(biāo)菌株，并結(jié)合所學(xué)知識準(zhǔn)確答題．