Question

19．幽門(mén)螺桿菌（Hp）感染是急慢性胃炎和消化道潰瘍的主要致病因素．在患者體內(nèi)采集樣本并制成菌液后，進(jìn)行分離培養(yǎng)．實(shí)驗(yàn)基本步驟如下：
配制培養(yǎng)基→滅菌、倒平板→X→培養(yǎng)→觀(guān)察
請(qǐng)回答：
（1）在微生物學(xué)中，選擇培養(yǎng)基是指允許特定種類(lèi)的微生物生長(zhǎng)，同時(shí)抑制或阻止其他種類(lèi)微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基．（2）在配制培養(yǎng)基時(shí)，要加入尿素和酚紅指示劑，這是因?yàn)镠p含有脲酶，它能以尿素作為氮源；若有Hp，則菌落周?chē)鷷?huì)出現(xiàn)紅色環(huán)帶．
（3）步驟X表示接種．在無(wú)菌條件下操作時(shí)，先將菌液稀釋?zhuān)�然后將菌液涂布到培養(yǎng)基平面上．菌液稀釋的目的是為了獲得單一菌落．
（4）臨床上用¹⁴C呼氣試驗(yàn)檢測(cè)人體是否感染Hp，其基本原理是Hp能將¹⁴C標(biāo)記的尿素分解為NH₃和¹⁴CO₂．
（5）測(cè)定菌數(shù)時(shí)，在對(duì)應(yīng)稀釋倍數(shù)為10⁶的培養(yǎng)基中，得到以下幾種結(jié)果，其中正確可信的是D
A．一個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是23
B．兩個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是22和26，取平均值24
C．三個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是21、5和52，取平均值26
D．四個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是21、30、24和25，取平均值25
（6）一同學(xué)在對(duì)應(yīng)稀釋倍數(shù)為10⁶的培養(yǎng)基中測(cè)得平板上菌落數(shù)的平均值為23.4，那么每毫升樣品中的菌株數(shù)是1.17×10⁸．（涂布平板時(shí)所用稀釋液的體積為0.2mL）

Answer 1

分析 1、接種最常用的方法是平板劃線(xiàn)法和稀釋涂布平板法．接種的目的是使聚集在一起的微生物分散成單個(gè)細(xì)胞．微生物的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)有5類(lèi)，分別是水、無(wú)機(jī)鹽、碳源、氮源及生長(zhǎng)因子．
2、由于細(xì)菌分解在尿素的過(guò)程中合成脲酶，脲酶將尿素分解成氨，會(huì)使培養(yǎng)基堿性增強(qiáng)，PH升高，所以可以用檢測(cè)pH的變化的方法來(lái)判斷尿素是否被分解，可在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，尿素被分解后產(chǎn)生氨，PH升高，指示劑變紅．
3、檢測(cè)土壤中細(xì)菌總數(shù)，可以看出采用的計(jì)數(shù)方法是稀釋涂布平板法進(jìn)行計(jì)數(shù)．用稀釋涂布平板法測(cè)定同一土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)時(shí)，在每一個(gè)梯度濃度內(nèi)，至少要涂布3個(gè)平板，選擇菌落數(shù)在30～300的進(jìn)行記數(shù)，求起平均值，再通過(guò)計(jì)算得出土壤中細(xì)菌總數(shù)．

解答 解：（1）培養(yǎng)基類(lèi)型中，選擇培養(yǎng)基是指允許特定種類(lèi)的微生物生長(zhǎng)，同時(shí)抑制或阻止其他種類(lèi)微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基．
（2）由于細(xì)菌分解在尿素的過(guò)程中合成脲酶，脲酶將尿素分解成氨，會(huì)使培養(yǎng)基堿性增強(qiáng)，PH升高，所以可以用檢測(cè)pH的變化的方法來(lái)判斷尿素是否被分解，可在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，尿素被分解后產(chǎn)生氨，PH升高，指示劑變紅．
（3）在實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程中要先滅菌、倒平板，再進(jìn)行接種．接種時(shí)先將菌液稀釋?zhuān)�以獲得單一菌落，再涂布到培養(yǎng)基平面上．
（4）臨床上用¹⁴C呼氣試驗(yàn)檢測(cè)人體是否感染Hp，其基本原理是Hp能將¹⁴C標(biāo)記的尿素分解為NH₃和¹⁴CO₂．
（5）A、平板數(shù)太少，所得數(shù)據(jù)具有一定的偶然性，故不可信，A錯(cuò)誤；
B、用稀釋涂布平板法測(cè)定樣品中的細(xì)菌數(shù)時(shí)，在每一個(gè)梯度濃度內(nèi)，至少要涂布3個(gè)平板，B錯(cuò)誤；
C、三個(gè)平板的菌落數(shù)差距太大，數(shù)據(jù)不可信，C錯(cuò)誤；
D、采用四個(gè)平板，并且數(shù)據(jù)比較接近，因此求平均值所得數(shù)據(jù)可信，D正確．
（6）由于菌落數(shù)的平均值為23.4，稀釋倍數(shù)是10⁶，所取稀釋液的體積為0.2mL，故每毫升樣品中的菌落數(shù)是23.4÷0.2×10⁶=1.17×10⁸．
故答案為：
（1）抑制或阻止   
（2）酚紅  脲酶  氮  紅 
（3）接種　涂布　單一 
（4）尿素 
（5）D   
（6）1.17×10⁸

點(diǎn)評(píng) 本題考查了微生物的分離與培養(yǎng)的有關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記培養(yǎng)基的類(lèi)型以及功能，掌握尿素分解菌選擇培養(yǎng)和鑒定的方法和原理，掌握微生物分離與計(jì)數(shù)的方法等，再結(jié)合所學(xué)知識(shí)準(zhǔn)確答題．