Question

6．請(qǐng)根據(jù)現(xiàn)代生物工程技術(shù)回答下列問(wèn)題：
（1）基因工程技術(shù)中對(duì)已獲得的目的基因，常采用PCR技術(shù)大量擴(kuò)增．該技術(shù)的基本過(guò)程是：目的基因DNA受熱變性后解鏈為單鏈，引物與單鏈相應(yīng)互補(bǔ)序列結(jié)合，然后在DNA聚合酶的作用下進(jìn)行互補(bǔ)鏈的合成（或延伸）（或子鏈的合成），如此重復(fù)循環(huán)多次．
（2）限制酶Smal能識(shí)別如圖，并在圖中箭頭位置切斷DNA．

用限制酶Smal切割獲取的目的基因需用T₄DNA連接酶構(gòu)建基因表達(dá)載體．
（3）培育轉(zhuǎn)基因小鼠除利用基因工程技術(shù)之外還需用到早期胚胎培養(yǎng)、胚胎移植等技術(shù)．
（4）制備單克隆抗體通常選用細(xì)胞融合技術(shù)，使（經(jīng)抗原刺激）B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，融合成功的細(xì)胞經(jīng)過(guò)篩選就是所需要的雜交瘤細(xì)胞．

Answer 1

分析 1、PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因的過(guò)程是：目的基因DNA受熱變性后解鏈為單鏈，引物與單鏈相應(yīng)互補(bǔ)序列結(jié)合，然后在熱穩(wěn)定性DNA聚合酶（Taq酶）作用下進(jìn)行延伸，如此重復(fù)循環(huán)多次，使目的基因的量呈指數(shù)（2ⁿ）增長(zhǎng)．
2、構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，用限制酶切割DNA后可能產(chǎn)生黏性末端，也可能產(chǎn)生平末端；平末端需用T₄DNA連接酶將雙鏈DNA片段“縫合”起來(lái)．“縫合”的過(guò)程，就是恢復(fù)被限制酶切開(kāi)的兩個(gè)脫氧核苷酸之間的磷酸二酯鍵的過(guò)程．

解答 解：（1）PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因的過(guò)程是：目的基因DNA受熱變性后解鏈為單鏈，引物與單鏈相應(yīng)互補(bǔ)序列結(jié)合，然后在熱穩(wěn)定性DNA聚合酶（Taq酶）作用下進(jìn)行延伸，如此重復(fù)循環(huán)多次，使目的基因的量呈指數(shù)（2ⁿ）增長(zhǎng)．
（2）如圖，限制酶Smal在圖中箭頭位置切斷DNA，獲取平口末端．構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，用限制酶切割DNA后可能產(chǎn)生黏性末端，也可能產(chǎn)生平末端；平末端需用T₄DNA連接酶將雙鏈DNA片段“縫合”起來(lái)．
（3）培育轉(zhuǎn)基因小鼠過(guò)程涉及到的技術(shù)有：基因工程、胚胎培養(yǎng)、胚胎移植．
（4）制備單克隆抗體時(shí)，將具有免疫能力的B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，融合成功的細(xì)胞經(jīng)過(guò)篩選，獲取能大量繁殖并能產(chǎn)生專一抗體的雜交瘤細(xì)胞．
故答案為：
（1）引物   互補(bǔ)鏈的合成（或延伸）  （或子鏈的合成）
（2）T₄DNA連接
（3）早期胚胎培養(yǎng)  胚胎移植
（4）（經(jīng)抗原刺激）B淋巴   骨髓瘤    雜交瘤

點(diǎn)評(píng) 本題考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的原理及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細(xì)節(jié)問(wèn)題；本題還結(jié)合利用胚胎干細(xì)胞培育轉(zhuǎn)基因小鼠，該過(guò)程涉及到基因工程、早期胚胎培養(yǎng)、胚胎移植各技術(shù)．