人類疾病的轉(zhuǎn)基因動物模型常用于致病機(jī)理的探討及治療藥物的篩選．利用正常大鼠制備遺傳性高血壓轉(zhuǎn)基因模型大鼠的流程如圖所示（注：基因B為高血壓相關(guān)基因）．

（1）進(jìn)行①過程之前，需對人工采集的精子進(jìn)行處理．完成②過程常采用的方法是，④過程中，為了防止污染，通常還要在細(xì)胞培養(yǎng)液中添加一定量的．
（2）從人體細(xì)胞中獲取基因B時用到的工具酶是，在構(gòu)建的基因表達(dá)載體中，高血壓相關(guān)基因的首端必須有，它是RNA聚合酶的識別和結(jié)合部位．
（3）圖示中甲為（時期）的去核卵母細(xì)胞，⑤過程操作技術(shù)叫做．
（4）要在分子水平上檢測成功導(dǎo)入的B基因在大鼠中是否成功表達(dá)，可采用方法，如果高血壓相關(guān)基因已在大鼠體內(nèi)成功表達(dá)，可用其建立高血壓轉(zhuǎn)基因動物模型．

【選修3現(xiàn)代生物科技專題】
轉(zhuǎn)基因草莓中有能表達(dá)乙肝病毒表面抗原的基因，由此可獲得用來預(yù)防乙肝的一種新型疫苗，其培育過程如圖所示（①至④代表過程，A至C代表結(jié)構(gòu)或細(xì)胞）：

（1）這種新型疫苗，在免疫學(xué)中屬于，圖中可看出該疫苗的化學(xué)本質(zhì)是．圖中①過程用到的酶是DNA連接酶，所形成的B叫做．
（2）②過程常用處理農(nóng)桿菌，使之成為細(xì)胞，利于完成轉(zhuǎn)化過程．
（3）圖中③過程叫做脫分化，④過程叫做，將葉盤培養(yǎng)成草莓幼苗的技術(shù)的原理是．
（4）②過程采用最多的是農(nóng)桿菌，在分子水平上，可采用的方法來檢測轉(zhuǎn)基因草莓果實提取液中有無相應(yīng)的抗原．
（5）乙肝病毒表面抗原基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)，并在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過程稱為．

利用轉(zhuǎn)基因奶牛乳腺生物反應(yīng)器可生產(chǎn)人的生長激素，根據(jù)圖回答有關(guān)問題．

（1）基因表達(dá)載體的組成，除了目的基因外，還必須有、以及標(biāo)記基因等．
（2）在體外受精前，要對精子進(jìn)行處理，對于牛的精子常采用．
（3）圖中①過程常采用，圖中②過程的培養(yǎng)液成分比較復(fù)雜，除一些無機(jī)鹽和有機(jī)鹽類外，還需要添加維生素、、氨基酸、核苷酸等成分，以及等物質(zhì)．
（4）早期胚胎發(fā)育到才進(jìn)行移植．

研究發(fā)現(xiàn)，將心肌細(xì)胞直接移植到心臟受損部位能夠改善心臟功能，是一種治療缺血性心臟病的有效方法．胚胎干細(xì)胞（ESC）在體外能誘導(dǎo)分化為心肌細(xì)胞，但同時會產(chǎn)生大量非心肌細(xì)胞．科研人員利用基因工程技術(shù)，使增強(qiáng)型綠色熒光蛋白（EGFP）基因在心肌細(xì)胞特異性表達(dá)，以利于從ESC分化來的細(xì)胞中篩選心肌細(xì)胞．該基因工程技術(shù)基本流程如圖．請回答：

（1）過程①中，利用限制酶Mlu I、Nhe I處理以獲得．
（2）過程②的目的是使基因在細(xì)胞中特異性表達(dá)．
（3）過程③中，從囊胚分離出，進(jìn)行培養(yǎng)可獲得ESC．
（4）進(jìn)行過程④時，（能/不能）在飼養(yǎng)層細(xì)胞上進(jìn)行．

如圖表示一個正常女性與一個患血友病男性結(jié)婚，通過減數(shù)分裂產(chǎn)生配子精子H與卵細(xì)胞F結(jié)合形成的受精卵發(fā)育成為一個患血友病男孩的過程．請據(jù)圖回答：

（1）圖中A、D、E的名稱依次是細(xì)胞、細(xì)胞和細(xì)胞．
（2）圖中E、F、H細(xì)胞的染色體組成依次是、 和
（3）若G與F結(jié)合，則后代的基因型是，表現(xiàn)型是．
（4）若這對夫婦沒有患白化病，但在家系調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，男方的父親患白化病而母親正常，女方的父母均正常而弟弟患白化病，那么這對夫婦生育一個正常子女的幾率是．

圖示為應(yīng)用生物工程獲得人們需要的生物新品種或新產(chǎn)品的方案．請回答下列問題：
方案Ⅰ：抗蟲基因

導(dǎo)入

棉花受體細(xì)胞→抗蟲棉；
方案Ⅱ：prG基因

導(dǎo)入

免疫過的B細(xì)胞→體外培養(yǎng)→單克隆抗體；
方案Ⅲ：抗血栓基因

導(dǎo)入

山羊受精卵→早期胚胎

移植

受體母羊→抗血栓山羊；
（1）方案Ⅰ中，通常利用Ti質(zhì)粒將抗蟲基因?qū)�入棉花受體細(xì)胞，為了使抗蟲基因順利連接到受體染色體基因組中，抗蟲基因通常位于Ti質(zhì)粒的片段中．從分子水平檢測抗蟲棉是否培育成功的方法是：．
（2）推測方案Ⅱ中prG基因最可能的作用是．
（3）方案Ⅲ中的轉(zhuǎn)抗血栓基因山羊可以通過分泌乳汁來生產(chǎn)抗血栓藥物．在構(gòu)建的相應(yīng)基因表達(dá)載體中，抗血栓基因的首端必須含有使其僅能在山羊細(xì)胞中特異性表達(dá)的，人們通常將此類轉(zhuǎn)基因動物稱為．
（4）方案Ⅲ中的早期胚胎在移植入受體母羊子宮之前，必須對胚胎進(jìn)行性別鑒定，一般是取處于時期的細(xì)胞進(jìn)行檢測．

普通酵母菌直接利用淀粉的能力很弱，有人將地衣芽孢桿菌的α-淀粉酶基因轉(zhuǎn)入酵母菌中，經(jīng)篩選得到了可高效利用淀粉的工程酵母菌菌種（過程如圖甲所示）．

（1）圖甲中，過程①需要的酶有．為達(dá)到篩選目的，平板內(nèi)的固體培養(yǎng)基應(yīng)加入．
（2）α-淀粉酶基因必須位于重組質(zhì)粒的啟動子和終止子之間的原因是．
（3）除了用選擇培養(yǎng)基篩選工程菌之外，還可用DNA雜交技術(shù)直接鑒定帶有重組質(zhì)粒的酵母菌．具體操作如圖乙所示，結(jié)合圖乙回答一下問題．

利用PCR技術(shù)制備DNA探針，需加入才能是DNA探針具有放射性．如何根據(jù)放射性自顯影結(jié)果做出判斷．

在一個遠(yuǎn)離大陸且交通不便的海島上，居民中患有甲種遺傳病的占

1

1600

（基因為A、a）．島上某家族系譜中，除患甲病外，還患有乙病（基因為B、b），兩種病中有一種為紅綠色盲，請據(jù)圖回答問題：

（1）病為紅綠色盲病，另一種遺傳病的致病基因在染色體上，為性遺傳�。�
（2）Ⅲ-11的基因型為，Ⅲ-11的直系血親關(guān)系有．（填編號）
（3）若Ⅲ-11與該島一個表現(xiàn)型正常的女子結(jié)婚，則其孩子中患甲病的概率為．
（4）若Ⅲ-11與該表現(xiàn)型正常的女子已生育一患甲病的孩子，則再生一個孩子為甲病的幾率是．
（5）Ⅱ-5和Ⅱ-6生育一個完全健康孩子的幾率是．

如圖表示某種綠色熒光蛋白基因表達(dá)載體的構(gòu)建過程．綠色熒光蛋白基因有720個堿基對（bp），質(zhì)粒有5369個堿基對（bp），其上酶切位點和標(biāo)記基因如圖．請回答：

（1）限制酶BamHI的識別序列和切割位點是G↓GATTC，則該酶切割DNA后形成的黏性末端是．過程③所需的工具酶是．
（2）②過程可以通過PCR技術(shù)進(jìn)行，為了準(zhǔn)確獲取目的基因，設(shè)計引物對是關(guān)鍵．設(shè)計引物對的依據(jù)．
（3）基因工程中常用限制酶酶切后再電泳的方法進(jìn)行重組質(zhì)粒的鑒定和篩選，電泳時DNA片段的遷移速率與片段大小呈負(fù)相關(guān)．

①圖中質(zhì)粒經(jīng)BamHⅠ、HindⅢ雙酶切后進(jìn)行電泳，出現(xiàn)了一條長度為5300bp的DNA條帶（如圖1），而重組質(zhì)粒經(jīng)BamHⅠ、HindⅢ雙酶切，電泳后形成了兩條長度分別為和的腿片段條帶．
②圖中質(zhì)粒經(jīng)BamHI單酶切后電泳圖譜如圖2．請在答題紙相應(yīng)圖中畫出重組質(zhì)粒用BamHI單酶切并電泳后條帶所在的大致位置．
（4）該基因工程中的受體細(xì)胞無任何抗生素抗性，某同學(xué)用只含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基篩選導(dǎo)入重組質(zhì)粒的受體細(xì)胞．他能否成功？為什么？．

腫瘤壞死因子（TNF）是人體內(nèi)免疫系統(tǒng)的組成部分，它在殺傷腫瘤細(xì)胞的同時也參與對關(guān)節(jié)的攻擊，引起風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎．腫瘤壞死因子抑制劑能與TNF結(jié)合，競爭性地抑制TNF與其受體結(jié)合，而TNF只有在與其受體結(jié)合后才能產(chǎn)生對關(guān)節(jié)的攻擊作用，因此有醫(yī)學(xué)專家利用腫瘤壞死因子抑制劑來治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎．西雅圖的目標(biāo)遺傳公司（TGC）將編碼腫瘤壞死因子抑制劑的基因?qū)�入腺相關(guān)病毒（AAV）中，再把AAV直接注射到病人的關(guān)節(jié)中，這樣相當(dāng)于送給病人一個持續(xù)不斷地提供腫瘤壞死因子抑制劑的“定點倉庫”，從而能長期有效地治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎．根據(jù)以上資料，分析回答問題．
（1）人體的免疫系統(tǒng)能通過釋放TNF等而殺傷腫瘤細(xì)胞，這體現(xiàn)了免疫系統(tǒng)的功能．從資料中可知，風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎是一種�。�
（2）一旦腫瘤壞死因子抑制劑與TNF結(jié)合，TNF便不能與其受體結(jié)合，原因應(yīng)是
（3）在該治療方案中，AAV的作用是．腫瘤壞死因子抑制劑基因?qū)�入AAV過程中需要的工具酶是，重組AAV中外源基因的首端應(yīng)該含有，它是識別和結(jié)合的部位．
（4）2007年，在接受這種治療的美國人中，有一例因為嚴(yán)重的感染而死亡，使人們格外關(guān)注這種治療方法的安全性問題．目前，基因治療技術(shù)還處在初級階段．在飽受慢性病的痛苦和接受存在一定危險性的治療方法之間，如何做才是符合病人利益和倫理道德的？．