8.尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)肥料,需經(jīng)細(xì)菌的分解才能更好地被植物利用.生活在土壤中的微生物種類和數(shù)量繁多,下列是從土壤中分離分解尿素細(xì)菌的有關(guān)問題,請(qǐng)分析回答:
(1)如圖是利用平板劃線法進(jìn)行微生物接種,把聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面.除此方法外,常用的微生物接種方法還有稀釋涂布平板法(寫一種).
(2)如果要對(duì)培養(yǎng)的菌落進(jìn)行純化,在培養(yǎng)基上劃線操作中,操作的第一步及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán),目的是對(duì)接種環(huán)進(jìn)行滅菌,灼燒的接種環(huán)冷卻后才能接種的原因是防止高溫殺死需接種的微生物.
(3)下面是兩種培養(yǎng)基配方
表1:A培養(yǎng)基配方
KH2PO4Na2HPO4MgSO4•7H2O葡萄糖尿素瓊脂H2O
1.4g2.1g0.2g10.0g1.0g15.0g1000mL
表2:B培養(yǎng)基配方
纖維
素粉
NaNO3Na2HPO4•7H2OKH2PO4MgSO4•7H2OKCl酵母
浸膏
H2O
5g1g1.2g0.9g0.5g0.5g0.5g1000mL
①配制培養(yǎng)基的操作步驟bdcea(用字母順序回答).
a.倒平板    b.計(jì)算    c.溶化    d.稱量    e.滅菌
②通常培養(yǎng)基采用高壓蒸汽滅菌法滅菌,在制備固體培養(yǎng)基的倒平板操作時(shí),平板冷凝后,應(yīng)將平板倒置,目的是防止培養(yǎng)皿內(nèi)壁上出現(xiàn)的冷凝水污染培養(yǎng)基.
③如果要分離土壤中能分解尿素的細(xì)菌,應(yīng)選擇上述A (A、B)配方的培養(yǎng)基,在該培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑,可初步鑒定出該種細(xì)菌能否分解尿素.
④據(jù)B培養(yǎng)基的成分,所培養(yǎng)微生物的同化作用類型是異養(yǎng)型.
(4)如果進(jìn)一步從尿素分解菌中提取出DNA,利用PCR技術(shù)擴(kuò)增,則每次循環(huán)復(fù)制可分為變性、復(fù)性和延伸三步.而尿素分解菌能分解尿素的直接原因是它們能合成脲酶,該物質(zhì)被提取出后的純化方法通常是凝膠色譜法.

分析 1、常用的接種方法有平板劃線法和稀釋涂布平板法.
2、常用的滅菌方法有高壓蒸汽滅菌、灼燒滅菌和干熱滅菌.
3、制備固體培養(yǎng)基的步驟是:計(jì)算、稱量、溶化、滅菌、倒平板.
4、如果要分離土壤中能分解尿素的細(xì)菌,應(yīng)選擇以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基;在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑,細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解為氨,PH增高,使指示劑變紅色.
5、PCR技術(shù)的原理是體外DNA的復(fù)制,該過程的每次循環(huán)可以分為高溫變性(DNA解鏈)、低溫復(fù)性(引物結(jié)合到互補(bǔ)DNA鏈)、中溫延伸(Taq酶從引物起始進(jìn)行互補(bǔ)鏈的合成)三步.
6、對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行純化的方法通常是凝膠色譜法.

解答 解:(1)題圖中微生物的接種中使用了接種環(huán),且是在固體培養(yǎng)基上接種,其接種方法是平板劃線法,平板劃線法是用接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線,從而將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面的接種方法;除此方法外,常用的微生物接種方法還有稀釋涂布平板法.
(2)接種環(huán)通過灼燒滅菌,灼燒的接種環(huán)需冷卻后才能接種的原因是防止高溫殺死需接種的微生物.
(3)①配制培養(yǎng)基的操作步驟是:計(jì)算、稱量、溶化、滅菌、倒平板.
②培養(yǎng)基通常采用高壓蒸汽滅菌法進(jìn)行滅菌,在制備固體培養(yǎng)基的倒平板操作時(shí),平板冷凝后,應(yīng)將平板倒置,目的是防止培養(yǎng)皿內(nèi)壁上出現(xiàn)的冷凝水污染培養(yǎng)基.
③如果要分離土壤中能分解尿素的細(xì)菌,應(yīng)選擇上述以尿素為唯一氮源的A培養(yǎng)基,在該培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑,可初步鑒定出該種細(xì)菌能否分解尿素.
④B培養(yǎng)基的成分中,碳源為有機(jī)物,可判斷所培養(yǎng)微生物的同化作用類型是異養(yǎng)型.
(4)利用PCR技術(shù)擴(kuò)增DNA的過程中,每次循環(huán)復(fù)制可分變性、復(fù)性好和延伸三步;尿素分解菌能分解尿素的直接原因是尿素分解菌能合成脲酶,脲酶能催化尿素的分解,脲酶的化學(xué)本質(zhì)是蛋白質(zhì),該物質(zhì)被提取出后的純化方法通常是凝膠色譜法.
故答案為:
(1)平板劃線     稀釋分散    稀釋涂布平板法
(2)滅菌 防止高溫殺死需接種的微生物
(3)①bdcea    ②高壓蒸汽滅菌 防止培養(yǎng)皿內(nèi)壁上出現(xiàn)的冷凝水污染培養(yǎng)基    ③A 酚紅  ④異養(yǎng)型
(4)變性、復(fù)性和延伸    脲酶   凝膠色譜法

點(diǎn)評(píng) 本題考查了微生物培養(yǎng)、PCR技術(shù)、蛋白質(zhì)的純化的相關(guān)知識(shí),考生識(shí)記培養(yǎng)基為微生物提供的營(yíng)養(yǎng)成分、培養(yǎng)微生物常用的接種方法、PCR技術(shù)的步驟,明確鑒定培養(yǎng)基鑒定微生物的原理和凝膠色譜法分離物質(zhì)的原理是解題的關(guān)鍵.

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