Question

（Ⅰ）限制性?xún)?nèi)切酶Ⅱ的識(shí)別序列和切點(diǎn)是-↓GATC-．在目的基因的兩側(cè)各有1個(gè)酶Ⅱ的切點(diǎn)．請(qǐng)畫(huà)出目的基因兩側(cè)被限制酶Ⅱ切割后所形成的黏性末端．

 

．
（Ⅱ）回答下列有關(guān)基因工程和細(xì)胞工程、胚胎工程的問(wèn)題：
（1）在基因工程的具體操作中，源自不同生物的DNA之所以能夠重組的原因是：

 

；相同的基因在不同的生物體內(nèi)，都能成功表達(dá)出相同的產(chǎn)物，其原因是：

 

．
（2）基因工程最終獲得成功的標(biāo)志是：

 

．
（3）在植物組織培養(yǎng)的再分化過(guò)程中，若要將愈傷組織誘導(dǎo)出根，則植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的濃度配比應(yīng)為：

 

．
（4）動(dòng)物細(xì)胞克�。�克隆培養(yǎng)法）要取得成功的最基本要求是

 

．為提高克隆形成率，還應(yīng)該在培養(yǎng)基中加入

 

 以支持生長(zhǎng)．
（5）某醫(yī)院病理室為確診一患者的腫瘤是良性還是惡性，切取了一小塊腫瘤組織進(jìn)行培養(yǎng)．培養(yǎng)之前，腫瘤組織必須先用

 

  等處理成單個(gè)細(xì)胞．若開(kāi)始培養(yǎng)時(shí)取一滴培養(yǎng)液觀察有100個(gè)腫瘤細(xì)胞，經(jīng)24h培養(yǎng)后，取一滴稀釋100倍后再取一滴（設(shè)三次的“一滴”等量）觀察，發(fā)現(xiàn)有64個(gè)腫瘤細(xì)胞，此腫瘤的細(xì)胞周期約為

 

 h．

Answer 1

考點(diǎn)：基因工程的原理及技術(shù),植物培養(yǎng)的條件及過(guò)程,動(dòng)物細(xì)胞與組織培養(yǎng)過(guò)程,動(dòng)物體細(xì)胞克隆

專(zhuān)題：

分析：1、基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫(kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成．
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等．
（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法．
（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲(chóng)鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．
2、在植物組織培養(yǎng)時(shí)，植物激素的使用：

激素使用情況	結(jié)果
先使用生長(zhǎng)素，后使用細(xì)胞分裂素	有利于細(xì)胞分裂，但細(xì)胞不分化
先使用細(xì)胞分裂素，后使用生長(zhǎng)素	細(xì)胞既分裂也分化
同時(shí)使用，且比例適中	促進(jìn)愈傷組織的形成
同時(shí)使用，且生長(zhǎng)素用量較高	有利于根的分化、抑制芽的形成
同時(shí)使用，且細(xì)胞分裂素用量較高	有利于芽的分化、抑制根的形成

解答： 解：（Ⅰ）限制性?xún)?nèi)切酶Ⅱ的識(shí)別序列和切點(diǎn)是-↓GATC-．在目的基因的兩側(cè)各有1個(gè)酶Ⅱ的切點(diǎn)．目的基因兩側(cè)被限制酶Ⅱ切割后所形成的黏性末端如圖：．
（Ⅱ）（1）所有生物的DNA分子結(jié)構(gòu)相似，因此源自不同生物的DNA能夠重組；所有生物共用一套遺傳密碼，因此相同的基因在不同生物體內(nèi)都能成功表達(dá)出相同的產(chǎn)物．
（2）基因工程最終獲得成功的標(biāo)志是：目的基因順利表達(dá)（或產(chǎn)生人們需要的功能物質(zhì)）．
（3）在植物組織培養(yǎng)的再分化過(guò)程中，若要將愈傷組織誘導(dǎo)出根，則植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的濃度配比應(yīng)為：生長(zhǎng)素多，細(xì)胞分裂素少．
（4）動(dòng)物細(xì)胞克�。�克隆培養(yǎng)法）要取得成功的最基本要求是：必須保證分離出來(lái)的細(xì)胞是一個(gè)而不是多個(gè)．為提高克隆形成率，還應(yīng)該在培養(yǎng)基中加入滋養(yǎng)細(xì)胞以支持生長(zhǎng)．
（5）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，要用胰蛋白酶處理，使組織細(xì)胞分散成單個(gè)細(xì)胞．開(kāi)始培養(yǎng)時(shí)一滴培養(yǎng)液有100個(gè)腫瘤細(xì)胞，經(jīng)24h培養(yǎng)后，一滴培養(yǎng)液中有6400個(gè)腫瘤細(xì)胞，因此2ⁿ×100=6400，分裂次數(shù)n=6，細(xì)胞周期約為24÷6=4h．
故答案為：
（Ⅰ）
（Ⅱ）（1）所有生物的DNA分子結(jié)構(gòu)相似      所有生物共用一套遺傳密碼．
（2）目的基因順利表達(dá)（或產(chǎn)生人們需要的功能物質(zhì)）  
（3）生長(zhǎng)素多，細(xì)胞分裂素少．
（4）必須保證分離出來(lái)的細(xì)胞是一個(gè)而不是多個(gè)   滋養(yǎng)細(xì)胞
（5）胰蛋白酶   4

點(diǎn)評(píng)：本題考查基因工程、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的原理及操作步驟；識(shí)記動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程及條件，能結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確答題．