Question

7．如圖為人工合成reAnti基因，轉(zhuǎn)入豬成纖維細胞，做成轉(zhuǎn)基因克隆豬的培育過程示意圖，請據(jù)圖回答：

（1）人工合成的reAnti基因可通過PCR技術(shù)手段迅速擴增．
（2）過程③要將重組質(zhì)粒導入豬胎兒成纖維細胞的方法是顯微注射法，重組質(zhì)粒導入之后，可通過DNA分子雜交技術(shù)，來檢測reAnti基因是否已重組到豬胎兒成纖維細胞的染色體DNA上．
（3）從豬中取胎兒成纖維細胞，用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理，然后進行分散培養(yǎng)．培養(yǎng)時，向培養(yǎng)箱中通入CO₂的目的是維持培養(yǎng)液的PH值；培養(yǎng)液的配方通常含有葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素等，一般還應(yīng)添加動物血清．
（4）去核前的卵母細胞應(yīng)培養(yǎng)到減數(shù)第二次分裂中期期．其去核后與成纖維細胞通過電刺激后融合，形成重組細胞．再利用物理或化學方法刺激，使之完成細胞分裂和發(fā)育，在體外培養(yǎng)成重組早期胚胎．
（5）在進行過程⑦操作前，應(yīng)利用激素對受體母豬進行同期發(fā)情處理．

Answer 1

分析 分析題圖：①是獲取目的基因的過程；②是基因表達載體的構(gòu)建過程；③將重組質(zhì)粒導入豬胎兒成纖維細胞的過程；④采用顯微技術(shù)去核；⑤是核移植過程；⑥動物細胞培養(yǎng)過程；⑦是胚胎移植過程；⑧是妊娠形成轉(zhuǎn)基因克隆豬的過程．

解答 解：（1）人工合成的reAnti基因可通過PCR技術(shù)手段擴增．
（2）將目的基因?qū)�入動物細胞常用顯微注射法；檢測目的基因（reAnti基因）是否導入受體細胞，可用DNA分子雜交技術(shù)．
（3）動物細胞培養(yǎng)時，需要用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理動物組織，使動物細胞分散成單個細胞．動物細胞培養(yǎng)時要放入到95%的空氣（保證細胞代謝）和5%CO₂（調(diào)節(jié)培養(yǎng)液的pH）培養(yǎng)箱中．培養(yǎng)液的配方通常含有葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素等，一般還應(yīng)添加動物血清．
（4）去核前的卵母細胞應(yīng)培養(yǎng)到減數(shù)第二次分裂中期才成熟．
（5）胚胎移植前，應(yīng)利用激素對受體母豬進行同情發(fā)情處理，目的是使胚胎移植入相同的生理環(huán)境．
故答案為：
（1）PCR        
（2）顯微注射法        DNA分子雜交
（3）胰蛋白酶或膠原蛋白酶        維持培養(yǎng)液的PH值        動物血清
（4）減數(shù)第二次分裂中期        
（5）同期發(fā)情

點評 本題結(jié)合我國首例綠色熒光蛋白（GFP）轉(zhuǎn)基因克隆豬的培育過程示意圖，考查基因工程的原理和技術(shù)、動物細胞核移植技術(shù)、動物細胞培養(yǎng)，要求考生識記基因工程的原理及操作過程，能準確判斷圖中各過程的名稱；識記動物細胞核移植的概念及過程；識記動物細胞培養(yǎng)的過程及條件．