Question

8．科學(xué)研究表明，氮素是水和土壤中重要的污染因子，氮肥經(jīng)土壤微生物分解后產(chǎn)生的氨對(duì)霧霾的貢獻(xiàn)率達(dá)20%以上，農(nóng)業(yè)污染逐漸引起科學(xué)界和政府的重視．為研究土壤微生物對(duì)氮素的分解作用，某研究人員分別對(duì)所取土樣進(jìn)行分解尿素的細(xì)菌的分離純化操作（A組）和土壤微生物計(jì)數(shù)操作（B組），過程如圖一，序號(hào)①〜⑨表示實(shí)驗(yàn)步驟．

（1）步驟①所用的小鐵鏟需采用干熱滅菌法進(jìn)行滅菌處理，稱取土樣時(shí)通常需在火焰（或酒精燈火焰）旁進(jìn)行．
（2）分析步驟③、④所用的培養(yǎng)基的成分，最大的區(qū)別是氮源（成分）種類不同．
（3）對(duì)分離出的細(xì)菌進(jìn)行長(zhǎng)期保存，常采用的方法是甘油管藏法．
（4）圖二所示的接種方法可以在圖一的步驟⑤（填序號(hào)）中采用，甲、乙、丙為劃線的三個(gè)區(qū)域，為正確完成接種過程，接種環(huán)至少進(jìn)行4次灼燒滅菌．
（5）步驟⑦中，對(duì)1mL菌液進(jìn)行系列稀釋10、100、1000倍，分別經(jīng)過步驟⑧的接種和培養(yǎng)后，觀察到菌落的平均數(shù)依次為2860、257、23，則可推測(cè)適宜的土樣稀釋倍數(shù)為1000倍，原因是步驟⑦的稀釋倍數(shù)為100倍時(shí)形成的菌落平均數(shù)在30〜300之間，步驟②已稀釋了10倍，共稀釋了1000倍．

Answer 1

分析 1、無菌技術(shù)的主要內(nèi)容
①對(duì)實(shí)驗(yàn)操作的空間、操作者的衣著和手，進(jìn)行清潔和消毒；
②將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進(jìn)行滅菌
③為避免周圍環(huán)境中微生物的污染，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行；
④實(shí)驗(yàn)操作時(shí)應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍的物品相接觸．
2、檢測(cè)土壤中細(xì)菌總數(shù)，可以看出采用的計(jì)數(shù)方法是稀釋涂布平板法進(jìn)行計(jì)數(shù)．用稀釋涂布平板法測(cè)定同一土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)時(shí)，在每一個(gè)梯度濃度內(nèi)，至少要涂布3個(gè)平板，選擇菌落數(shù)在30～300的進(jìn)行記數(shù)，求其平均值，再通過計(jì)算得出土壤中細(xì)菌總數(shù)．

解答 解：（1）步驟①所用的小鐵鏟需采用干熱滅菌法進(jìn)行滅菌處理，稱取土樣時(shí)通常需在火焰（或酒精燈火焰）旁進(jìn)行，從而防止雜菌的污染．
（2）步驟③為擴(kuò)大培養(yǎng)，而步驟④為選擇培養(yǎng)基，選擇培養(yǎng)使用的培養(yǎng)基為選擇培養(yǎng)基，因此所用的培養(yǎng)基的成分，最大的區(qū)別是氮源種類不同，即選擇培養(yǎng)基中需要以尿素作為唯一氮源．
（3）對(duì)分離出的細(xì)菌進(jìn)行長(zhǎng)期保存，常采用甘油管藏法．
（4）圖中步驟⑧接種后需要計(jì)數(shù)，只能使用稀釋涂布平板法．而圖二表示平板劃線法，可以在圖一的步驟⑤中采用，甲、乙、丙為劃線的三個(gè)區(qū)域，為正確完成接種過程，在每次接種前和接種后均需要灼燒滅菌，因此接種環(huán)至少進(jìn)行4次灼燒滅菌．
（5）步驟⑦中，對(duì)1mL菌液進(jìn)行系列稀釋10、100、1000倍，分別經(jīng)過步驟⑧的接種和培養(yǎng)后，觀察到菌落的平均數(shù)依次為2860、257、23，步驟⑦的稀釋倍數(shù)為100倍時(shí)形成的菌落平均數(shù)在30〜300之間，步驟②已稀釋了10倍，共稀釋了1000倍．
故答案為：
（1）干熱滅菌        火焰（或酒精燈火焰）
（2）氮源
（3）甘油管藏法
（4）⑤4
（5）步驟⑦的稀釋倍數(shù)為100倍時(shí)形成的菌落平均數(shù)在30〜300之間，步驟②已稀釋了10倍，共稀釋了1000倍

點(diǎn)評(píng) 本題考查了微生物的分離和培養(yǎng)的有關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記無菌技術(shù)的主要內(nèi)容，識(shí)記接種微生物常用的兩種方法，能結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確答題．