Question

4．我國曾經(jīng)發(fā)生過因“非典型性肺炎”而死亡的病例，經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，該病是由SARS病毒（一種RNA病毒）感染所引起的疾�。甋ARS病毒表面的S蛋白是主要的病毒抗原，在SARS病人康復(fù)后的血清中有抗S蛋白的特異性抗體．某研究小組為了研制預(yù)防SARS病毒的疫苗，開展了前期研究工作，其簡要的操作流程如圖：

（1）實驗步驟①所代表的反應(yīng)過程是反轉(zhuǎn)錄．
（2）步驟②構(gòu)建重組表達載體A和重組表達載體B必須使用限制酶和DNA連接酶，后者的作用是將用限制性核酸內(nèi)切酶切割的S蛋白基因和載體連接起來．
（3）如果省略步驟②而將大量擴增的S蛋白基因直接導(dǎo)入大腸桿菌，一般情況下，不能得到表達的S蛋白，其原因是S蛋白基因在大腸桿菌中不能復(fù)制，也不能合成S蛋白基因的mRNA．
（4）為了檢驗步驟④所表達的S蛋白是否與病毒S蛋白有相同的免疫反應(yīng)特性，可用大腸桿菌中表達的S蛋白與SARS康復(fù)病人血清進行抗原-抗體特異性反應(yīng)實驗，從而得出結(jié)論．
（5）步驟④和⑥的結(jié)果相比，原核細胞表達的S蛋白與真核細胞表達的S蛋白的氨基酸序列相同（填“相同”或“不同”），根本原因是表達蛋白質(zhì)所用的基因相同．

Answer 1

分析 根據(jù)逆轉(zhuǎn)錄的概念分析（1）．根據(jù)限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶的作用分析（2）．根據(jù)S基因在大腸桿菌中不能進行復(fù)制，也不能轉(zhuǎn)錄分析（3）．根據(jù)抗原一抗體特異性反應(yīng)分析（4）．根據(jù)基因控制蛋白質(zhì)的合成分析（5）．

解答 解：（1）實驗步驟①RNA控制DNA合成，該過程是反（逆）轉(zhuǎn)錄．
（2）步驟②構(gòu)建重組表達載體A和重組表達載體B，必須使用同種限制性核酸內(nèi)切酶切割目的基因和載體，形成相同的粘性末端，再用DNA連接酶，形成重組DNA．
（3）如果省略步驟③基因表達載體的構(gòu)建，而將大量擴增的S基因直接導(dǎo)入大腸桿菌，一般情況下，不能得到表達的S蛋白，其原因是S基因在大腸桿菌中不能進行復(fù)制，也不能進行以其為模板合成S基因的mRNA（或轉(zhuǎn)錄）．
（4）步驟④檢測所表達的S蛋白的特征，可用大腸桿菌中表達的S蛋白與SARS康復(fù)病人血清進行抗原-抗體特異性反應(yīng)實驗，如果能夠特異性的結(jié)合，說明表達成功．
（5）步驟④和⑥的結(jié)果相比，原核細胞表達的S蛋白與真核細胞表達的S蛋白的氨基酸序列相同，根本原因是表達蛋白質(zhì)所用的目的基因相同．
故答案為：
（1）反轉(zhuǎn)錄　
（2）DNA連接　載體　
（3）復(fù)制　合成S蛋白基因的mRNA
（4）大腸桿菌中表達的S蛋白　 
（5）相同　   表達蛋白質(zhì)所用的基因相同

點評 本題考查基因工程的步驟等相關(guān)知識，意在考查學(xué)生理解基因工程的工具和步驟，有一定的綜合性．