Question

8．下面是從土壤中分離與計(jì)數(shù)自生固氮菌的實(shí)驗(yàn)，完成下列問題：
實(shí)驗(yàn)原理：農(nóng)田的表層土壤中，自生固氮菌的含量比較多．將用表層土壤制成的稀泥漿，接種到無氮培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)．在這種情況下，只有自生固氮菌才能生長繁殖．
材料用具：農(nóng)田的表層土壤、無氮培養(yǎng)基、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、盛有9mL無菌水的試管、無菌吸管、無菌涂布器、無菌培養(yǎng)皿、盛有90mL無菌水的錐形瓶、恒溫箱．
（1）方法步驟：
①倒平板：分別將無氮培養(yǎng)基、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基倒平板，應(yīng)在酒精燈火焰旁操作．
②制備土壤稀釋液
③涂布：按照由10⁷～10³稀釋度的順序分別吸取0.1mL進(jìn)行平板涂布，每個(gè)稀釋度下，無氮培養(yǎng)基應(yīng)至少涂布3個(gè)平板，牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基涂布1個(gè)．
④培養(yǎng)：放入恒溫箱內(nèi)，在28℃～30℃下培養(yǎng)3d～4d．
⑤細(xì)菌的計(jì)數(shù)：當(dāng)菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)，選取菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)．如果測定的平均值為50，則每克樣品中的菌株數(shù)是5×10⁷．（稀釋度是10⁵）
（2）預(yù)期結(jié)果：相同稀釋度下，牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上的菌落數(shù)多于（選填“多于”或“少于”）無氮培養(yǎng)基上的數(shù)目．原因是無氮培養(yǎng)基上只有自生固氮菌能生長繁殖，而牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上大多數(shù)菌類都能生長．

Answer 1

分析 微生物培養(yǎng)的關(guān)鍵是無菌操作，是由的接種過程都應(yīng)該在酒精燈火焰旁進(jìn)行．為避免實(shí)驗(yàn)誤差，保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般設(shè)置3～5個(gè)平板，選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，并取平均值．

解答 解：（1）①在酒精燈火焰旁倒平板，可以減少雜菌污染．
③為了避免實(shí)驗(yàn)誤差，保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般設(shè)置3～5個(gè)平板，空白對照組需要牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基涂布1個(gè)．
⑤選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，并取平均值．如果測定的平均值為50，則每克樣品中的菌落數(shù)為（50÷0.1）×10⁵=5×10⁷．
（2）肉膏蛋白胨培養(yǎng)基作為對照，以消除無關(guān)變量對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，該培養(yǎng)基適合其他細(xì)菌生存，所以，它比無氮培養(yǎng)基上的菌落數(shù)目多．
故答案為：
（1）酒精燈火焰    3   1   30～300   5×10⁷
（2）多于    無氮培養(yǎng)基上只有自生固氮菌能生長繁殖，而牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上大多數(shù)菌類都能生長

點(diǎn)評 本題通過探究實(shí)驗(yàn)的過程考查微生物的培養(yǎng)、分離和計(jì)數(shù)等知識點(diǎn)．