Question

11．如圖是兩種限制酶的切割產(chǎn)生DNA片段末端的形式，請(qǐng)據(jù)圖冋答：

（1）圖中Sma I限制酶識(shí)別的堿基序列是CCCGGG，切割位點(diǎn)在G和C之間，兩種限制酶識(shí)別并切割的位點(diǎn)不同，說(shuō)明酶的作用具有專一性．
（2）將限制酶切割下來(lái)的DNA片段拼接成DNA分子，需要的工具是DNA連接酶，新形成的化學(xué)鍵是磷酸二酯鍵．
（3）用EcoR I將目的基因從一個(gè)DNA分子上切割下來(lái)，需要切兩處，同時(shí)產(chǎn)生4個(gè)黏性末端．
（4）基因工程操作中，通常是利用質(zhì)粒作為載體將重組DNA分子送入細(xì)胞，質(zhì)粒除了結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、獨(dú)立于細(xì)菌擬核之外，還有哪些特點(diǎn)符合作為載體的條件？（請(qǐng)回答兩點(diǎn)）具有自我復(fù)制能力、有多個(gè)限制酶切點(diǎn)供外源DNA片段插入、有標(biāo)志基因供重組DNA的鑒定和選擇、進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)能自我復(fù)制或整合到染色體DNA上隨染色體DNA同步復(fù)制（答出兩點(diǎn)即可）．

Answer 1

分析 1、關(guān)于限制酶，考生可以從以下幾方面把握：
（1）來(lái)源：主要從原核生物中分離純化出來(lái)．
（2）特異性：能夠識(shí)別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷裂．
（3）結(jié)果：形成黏性末端或平末端．
2、DNA連接酶：連接的是兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵．
3、運(yùn)載體：
（1）常用的運(yùn)載體：質(zhì)粒、噬菌體的衍生物、動(dòng)植物病毒．
（2）作為運(yùn)載體必須具備的條件：①要具有限制酶的切割位點(diǎn)； ②要有標(biāo)記基因（如抗性基因），以便于重組后重組子的篩選；③能在宿主細(xì)胞中穩(wěn)定存在并復(fù)制；④是安全的，對(duì)受體細(xì)胞無(wú)害，而且要易從供體細(xì)胞分離出來(lái)．
（3）天然的質(zhì)粒不能直接作為載體，基因工程中用到的質(zhì)粒都是在天然質(zhì)粒的基礎(chǔ)上進(jìn)行過(guò)人工改造的．
4、分析題圖：圖1切割后產(chǎn)生的是黏性末端，圖2切割后產(chǎn)生的是平末端．

解答 解：（1）由圖可知，限制酶Sma I識(shí)別的堿基序列是CCCGGG，切割位點(diǎn)在G和C之間；兩種限制酶識(shí)別并切割的位點(diǎn)不同，即一種酶只能識(shí)別一種特定的核苷酸序列，這說(shuō)明酶的作用具有專一性．
（2）將限制酶切割下來(lái)的DNA片段拼接成DNA分子，需要DNA連接酶，其連接的是兩個(gè)DNA片段之間的磷酸二酯鍵．
（3）圖1中EcoR I只是切開(kāi)了目的基因的一側(cè)，要將目的基因從一個(gè)DNA分子上切割下來(lái)，還需要切割目的基因的另一側(cè)，即共需要切兩處，同時(shí)產(chǎn)生4個(gè)黏性末端．
（4）作為基因工程載體的條件：具有自我復(fù)制能力、有多個(gè)限制酶切點(diǎn)供外源DNA片段插入、有標(biāo)志基因供重組DNA的鑒定和選擇、進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)能自我復(fù)制或整合到染色體DNA上隨染色體DNA同步復(fù)制．
故答案為：
（1）CCCGGG       G和C     專一性
（2）DNA連接酶     磷酸二酯鍵
（3）兩   4
（4）具有自我復(fù)制能力、有多個(gè)限制酶切點(diǎn)供外源DNA片段插入、有標(biāo)志基因供重組DNA的鑒定和選擇、進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)能自我復(fù)制或整合到染色體DNA上隨染色體DNA同步復(fù)制（答出兩點(diǎn)即可）

點(diǎn)評(píng) 本題結(jié)合圖解，考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，重點(diǎn)考查基因工程的操作工具，要求考生識(shí)記限制酶的特點(diǎn)及作用結(jié)果；識(shí)記DNA連接酶的作用；識(shí)記作為運(yùn)載體需要具備的條件．