Question

1．下圖是制備抗埃博拉病毒VP40蛋白的單克隆抗體的過程，請回答：

（1）埃博拉病毒（EBO）的遺傳物質(zhì)是RNA，EBO病毒容易變異的原因是RNA是單鏈結(jié)構(gòu)，突變率較高，穩(wěn)定性較差．
（2）科研人員利用經(jīng)EBO免疫后小鼠的B淋巴細(xì)胞與鼠的瘤細(xì)胞進(jìn)行雜交，獲得純凈的單一品種抗體，其特點(diǎn)是特異性強(qiáng)、靈敏度高、反應(yīng)快（產(chǎn)量大），可以用此抗體與放射性同位素、化學(xué)藥物或細(xì)胞毒素相結(jié)合，制成“生物導(dǎo)彈”，抗擊埃博拉病毒（EBO）．選擇培養(yǎng)基上存活的雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生的抗體不是（是、不是）單克隆抗體．
（3）過程①中選用EcoRI和XhoI兩種限制酶切割的優(yōu)點(diǎn)是防止目的基因（質(zhì)粒）的自身環(huán)化．
（4）過程②中首先需要用Ca²⁺處理大腸桿菌，使其處于感受態(tài)，VP40基因進(jìn)入大腸桿菌后維持穩(wěn)定并表達(dá)的過程稱為轉(zhuǎn)化．
（5）圖示過程應(yīng)用的生物技術(shù)有基因工程、動(dòng)物細(xì)胞融合、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)（至少答出三種）．

Answer 1

分析 1、圖示過程中，①為獲取目的基因，形成重組質(zhì)粒，②為目的基因?qū)�入�?dǎo)入大腸桿菌，③為獲取相應(yīng)的蛋白質(zhì)，④為形成雜交瘤細(xì)胞．
PCR技術(shù)的過程：高溫變性、低溫復(fù)性、中溫延伸．條件：模板DNA、四種脫氧核苷酸、一對引物、熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Taq酶）．
2、獲得目的基因的方法：①從基因文庫中獲取 ②利用PCR技術(shù)擴(kuò)增 ③人工合成（化學(xué)合成）．原核基因采取直接分離獲得，真核基因是人工合成．
3、DNA重組技術(shù)至少需要三種工具：限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶）、DNA連接酶、運(yùn)載體．
4、動(dòng)物細(xì)胞融合原理是：細(xì)胞增殖、細(xì)胞膜的流動(dòng)性．
細(xì)胞融合的方法有：物理法：離心、振動(dòng)、電激；化學(xué)法：聚乙二醇；生物法：滅活的病毒（滅活的仙臺(tái)病毒）．
最廣泛的應(yīng)用是：制備單克隆抗體．一個(gè)B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體．從血清中分離出的抗體產(chǎn)量低、純度低、特異性差．

解答 解：（1）埃博拉病毒（EBO）的遺傳物質(zhì)是RNA，而RNA是單鏈結(jié)構(gòu)，突變率較高，穩(wěn)定性較差，所以EBO病毒容易變異．
（2）經(jīng)EBO免疫后小鼠體內(nèi)可獲取漿細(xì)胞，其與鼠的瘤細(xì)胞進(jìn)行雜交，獲得純凈的單一品種抗體，即單克隆抗體，其特點(diǎn)是特異性強(qiáng)、靈敏度高、反應(yīng)快（產(chǎn)量大），可以用此抗體與藥物制成“生物導(dǎo)彈”，抗擊埃博拉病毒（EBO）．選擇培養(yǎng)基上存活的雜交瘤細(xì)胞沒有經(jīng)過擴(kuò)大培養(yǎng)，其產(chǎn)生的抗體不是單克隆抗體．
（3）（2）EcoRI和XhoI切割形成的黏性末端不同，而DNA連接酶只能將具有相同黏性末端的DNA片段連接起來，因此為了防止目的基因反向粘連和質(zhì)粒自行環(huán)化，酶切時(shí)可選用的酶是EcoRI和XhoI，提高連接成功率．
（4）VP40基因進(jìn)入大腸桿菌細(xì)胞，并在大腸桿菌內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)，該過程可稱為轉(zhuǎn)化．
（5）圖示過程應(yīng)用的生物技術(shù)有基因工程、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、動(dòng)物細(xì)胞融合等．
故答案為：
（1）RNA是單鏈結(jié)構(gòu)，突變率較高，穩(wěn)定性較差
（2）經(jīng)EBO免疫后      特異性強(qiáng)、靈敏度高、反應(yīng)快（產(chǎn)量大）（答出兩點(diǎn)即給分）   生物導(dǎo)彈  不是
（3）防止目的基因（質(zhì)粒）的自身環(huán)化    
（4）轉(zhuǎn)化
（5）基因工程、動(dòng)物細(xì)胞融合、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)

點(diǎn)評 本題綜合性較強(qiáng)，考查了基因工程、單克隆抗體的制備等知識(shí)，要求考生具有扎實(shí)的基礎(chǔ)知識(shí)，并構(gòu)建一定的知識(shí)網(wǎng)絡(luò)．