Question

2．某研究小組欲將已知抗除草劑基因?qū)�人原生質(zhì)體培育抗除草劑大豆．請回答下列問題：
（1）為獲得大量抗除草劑基因，可通過PCR技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增，也可將其連接到質(zhì)粒上，通過大腸桿菌培養(yǎng)擴(kuò)增．
（2）制備葉片原生質(zhì)體的酶混合液中，一般含較高濃度的甘露醇，其目的是避免制備的原生質(zhì)體吸水脹破．酶混合液需通過過濾（G6玻璃砂漏斗）滅菌，才能用于無菌原生質(zhì)體的制備，整個(gè)無菌操作過程需在超凈臺(tái)中進(jìn)行．
（3）可通過顯微注射方法，直接將抗除草劑基因?qū)�入原生質(zhì)體的細(xì)胞核．此外，還可用聚乙二醇融合、電擊等方法導(dǎo)入．導(dǎo)入后的原生質(zhì)體需再生出細(xì)胞壁，經(jīng)持續(xù)分裂獲得愈傷組織，進(jìn)一步分化獲得再生植株并擴(kuò)大繁殖．
（4）利用帶有標(biāo)記的抗除草劑基因特殊片段與從轉(zhuǎn)基因植株提取的RNA進(jìn)行分子雜交，驗(yàn)證抗除草劑基因是否被整合到受體的細(xì)胞中并轉(zhuǎn)錄．

Answer 1

分析 1、植物組織培養(yǎng)過程：離體的植物器官、組織或細(xì)胞脫分化形成愈傷組織，愈傷組織再分化形成胚狀體，進(jìn)而形成完整的植株．
2、植物組織培養(yǎng)需要的條件：①消毒滅菌；②一定濃度的植物激素；③適宜的溫度；④充足的養(yǎng)料．

解答 解：（1）可通過PCR技術(shù)進(jìn)行體外擴(kuò)增，獲得大量抗除草劑基因．之后抗除草劑基因和運(yùn)載體質(zhì)粒重組，構(gòu)建基因表達(dá)載體．
（2）用酶混合液處理植物細(xì)胞時(shí)，酶混合液中含有適宜濃度的甘露醇，其作用是細(xì)胞內(nèi)外的滲透壓，防止細(xì)胞吸水脹破．植物組織培養(yǎng)過程中需要無菌無毒的環(huán)境，因此酶混合液需通過過濾（G6玻璃砂漏斗）滅菌，才能用于無菌原生質(zhì)體的制備，整個(gè)無菌操作過程需在超凈臺(tái)中進(jìn)行．
（3）可通過顯微注射方法，直接將抗除草劑基因?qū)�入原生質(zhì)體的細(xì)胞核．導(dǎo)入后的原生質(zhì)體需再生出細(xì)胞壁，形成重組細(xì)胞，經(jīng)持續(xù)分裂獲得愈傷組織，進(jìn)一步分化獲得再生植株并擴(kuò)大繁殖．
（4）要檢驗(yàn)抗除草劑基因是否被整合到受體的細(xì)胞中并轉(zhuǎn)錄，可以用RNA與DNA分子雜交技術(shù)驗(yàn)證．
故答案為：
（1）PCR     質(zhì)粒
（2）吸水脹破     過濾（G6玻璃砂漏斗）   超凈臺(tái)
（3）顯微注射      細(xì)胞壁
（4）分子雜交

點(diǎn)評 本題考查植物組織培養(yǎng)、基因工程技術(shù)，要求考生識(shí)記植物組織培養(yǎng)的過程、條件及相關(guān)應(yīng)用；識(shí)記基因工程的原理和具體步驟的相關(guān)內(nèi)容，能結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確答題．