Question

19．用酵母菌生產(chǎn)人的乙型肝炎病毒（HBV）疫苗是第一個(gè)真核細(xì)胞基因工程的商業(yè)化產(chǎn)品．回答下列問(wèn)題：
（1）DNA重組技術(shù)的基本工具至少有三種，通常用加工處理過(guò)的動(dòng)植物病毒或者質(zhì)粒作為運(yùn)載體，DNA連接酶可將HBV的遺傳物質(zhì)與目的基因連接起來(lái)，由此可以知道HBV是DNA （填“DNA”或“RNA”）病毒．
（2）早期基因工程操作常用大腸桿菌作為受體細(xì)胞，首先用鈣離子處理細(xì)胞，使細(xì)胞處于感受態(tài)，從而容易吸收外界DNA分子．導(dǎo)入受體細(xì)胞后，目的基因的檢測(cè)包括檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA上是否插入目的基因、目的基因是否轉(zhuǎn)錄和目的基因能否表達(dá)．
（3）用轉(zhuǎn)基因動(dòng)物生產(chǎn)藥物時(shí)，轉(zhuǎn)基因動(dòng)物進(jìn)入泌乳期后，可以通過(guò)分泌的乳汁來(lái)生產(chǎn)藥物，因而稱(chēng)作乳腺發(fā)生器．科學(xué)家將基因表達(dá)載體用顯微注射的方法注入受精卵中，受精卵在體外發(fā)育成胚胎后通過(guò)胚胎移植技術(shù)，將其移入受體子宮內(nèi)發(fā)育成轉(zhuǎn)基因動(dòng)物．

Answer 1

分析 1、基因工程的基本工具
（1）“分子手術(shù)刀”--限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶）：能夠識(shí)別雙鏈DNA分子的某種特定的核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開(kāi)，因此具有專(zhuān)一性．
（2）“分子縫合針”--DNA連接酶
兩種DNA連接酶（E•coliDNA連接酶和T₄DNA連接酶）的比較：
①相同點(diǎn)：都縫合磷酸二酯鍵．
②區(qū)別：E•coliDNA連接酶來(lái)源于大腸桿菌，只能將雙鏈DNA片段互補(bǔ)的黏性末端之間的磷酸二酯鍵連接起來(lái)；而T₄DNA連接酶來(lái)源于T₄噬菌體，可用于連接粘性末端和平末端，但連接效率較低．
（3）“分子運(yùn)輸車(chē)”--載體：最常用的載體是質(zhì)粒，它是一種裸露的、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單的、獨(dú)立于細(xì)菌染色體之外，并具有自我復(fù)制能力的雙鏈環(huán)狀DNA分子．
2、基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫(kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成．
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等．
（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法．
（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲(chóng)鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）DNA重組技術(shù)的基本工具至少有三種，包括限制酶、DNA連接酶、運(yùn)載體，加工過(guò)的動(dòng)植物病毒或質(zhì)粒常作為基因工程的運(yùn)載體．DNA連接酶能將DNA片段連接起來(lái)，若DNA連接酶可將HBV的遺傳物質(zhì)與目的基因連接起來(lái)，則可以說(shuō)明HBV是DNA病毒．
（2）將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞常用感受態(tài)轉(zhuǎn)化法，即用鈣離子處理細(xì)胞，使細(xì)胞處于一種能吸收周?chē)�環(huán)境中DNA分子的感受態(tài)．導(dǎo)入受體細(xì)胞后，目的基因的檢測(cè)過(guò)程包括：檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA上是否插入目的基因，目的基因是否轉(zhuǎn)錄和目的基因是否表達(dá)．
（3）也可以用轉(zhuǎn)基因動(dòng)物生產(chǎn)藥物，轉(zhuǎn)基因動(dòng)物進(jìn)入泌乳期后，可以通過(guò)分泌的乳汁來(lái)生產(chǎn)藥物，因而稱(chēng)作乳腺發(fā)生器．科學(xué)家將基因表達(dá)載體用顯微注射的方法注入受精卵中，受精卵在體外發(fā)育成胚胎后通過(guò)胚胎移植技術(shù)，將其移入受體子宮內(nèi)發(fā)育成轉(zhuǎn)基因動(dòng)物．
故答案為：
（1）運(yùn)載體     DNA
（2）鈣離子     感受態(tài)     轉(zhuǎn)錄     表達(dá)
（3）乳腺發(fā)生器    胚胎移植

點(diǎn)評(píng) 本題考查了基因工程以及胚胎工程的有關(guān)知識(shí)，要求考生能夠識(shí)記基因工程的操作步驟，識(shí)記基因工程的三種操作工具，掌握目的基因?qū)�入�?xì)胞的方法，再結(jié)合所學(xué)知識(shí)準(zhǔn)確答題．