Question

如圖是某轉(zhuǎn)基因煙草的培育過程，箭頭表示相關(guān)限制酶的酶切位點．請據(jù)圖分析回答：

（1）目的基因可用PCR技術(shù)擴增，該技術(shù)利用

 

原理，PCR反應(yīng)體系中應(yīng)加入

 

酶．
（2）已知幾種限制酶識別序列及其切割位點如下表所示：

限制酶	BamHI	HindI	EcoRI	SmnI
識別序列及其切割位點

圖中①、②過程為減少質(zhì)粒和含目的基因的外源DNA片段自身環(huán)化，并使插入片段盡可能小，應(yīng)選用限制酶

 

對外源DNA、質(zhì)粒進行切割．圖中所示的質(zhì)粒分子經(jīng)Sma I切割后含有

 

個游離的磷酸集團．若需要對Sma I切割過后的末端進行連接，應(yīng)使用

 

DNA連接酶處理．
（3）要將目的基因通過農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法導(dǎo)入植物細胞，應(yīng)先用

 

處理農(nóng)桿菌，使之轉(zhuǎn)變成為感受態(tài)，以利于表達載體進入．經(jīng)⑥過程形成不同的組織器官，是細胞

 

的結(jié)果．

Answer 1

考點：基因工程的應(yīng)用,PCR技術(shù)的基本操作和應(yīng)用

專題：

分析：分析題圖：圖示表示轉(zhuǎn)基因煙草的培育過程，①是含有目的基因的外源DNA分子；②是質(zhì)粒，可作為基因工程的運載體；③表示基因表達載體的構(gòu)建過程；④表示采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將目的基因?qū)�入受體細胞；⑤表示脫分化過程；⑥表示再分化過程．

解答： 解：（1）PCR技術(shù)的原理是：DNA復(fù)制，PCR反應(yīng)體系中應(yīng)加入熱穩(wěn)定DNA聚合酶．
（2）限制酶SmaI位于目的基因中，用此酶切割會破壞目的基因．所以為減少質(zhì)粒和含目的基因的外源DNA片段自身環(huán)化，并使插入片段盡可能小，應(yīng)選用限制酶EcoRI和HindⅢ對外源DNA、質(zhì)粒進行切割．圖中質(zhì)粒只含有一個限制酶Sma I的切割位點，所以圖示質(zhì)粒分子經(jīng)Sma I切割后含有2個游離的磷酸集團．Sma I切割過后形成的是平口末端，T₄DNA連接酶可以連接平末端．
（3）要將目的基因?qū)�入微生物細胞，�?yīng)先用Ca²⁺處理微生物細胞，使之轉(zhuǎn)變成為感受態(tài)，以利于表達載體進入．經(jīng)⑥過程形成不同的組織器官，是細胞分裂和分化的結(jié)果．
故答案為：
（1）DNA復(fù)制   熱穩(wěn)定DNA聚合酶
（2）EcoRI和HindⅢ2    DNA
（3）Ca²⁺分裂和分化

點評：本題結(jié)合轉(zhuǎn)基因煙草的培育過程圖，考查基因工程的應(yīng)用、PCR技術(shù)的原理和條件、植物組織培養(yǎng)過程等知識，要求考生識記基因工程的操作步驟和植株組織培養(yǎng)過程，能準確判斷圖中各數(shù)字表達的含義，結(jié)合圖中質(zhì)粒和外源DNA分子的含有酶切位點的情況，選擇合適的限制酶進行切割．