Question

2．如表是幾種限制酶識(shí)別序列及其切割位點(diǎn)，圖1、圖2中標(biāo)注了質(zhì)粒和目的基因中相關(guān)限制酶的酶切位點(diǎn)，其中切割位點(diǎn)相同的酶不重復(fù)標(biāo)注．請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

限制酶	BamHⅠ	BclⅠ	Sau3AⅠ	HindⅢ
識(shí)別序列及切割位點(diǎn)

（1）質(zhì)粒載體作為基因工程的工具，應(yīng)具有的基本條件有具有標(biāo)記基因、具有一個(gè)或多個(gè)限制酶切點(diǎn)、能在受體細(xì)胞中復(fù)制并穩(wěn)定保存（答出兩點(diǎn)即可），而作為基因表達(dá)載體，除了滿(mǎn)足上述基本條件外，還需具有啟動(dòng)子和終止子．
（2）根據(jù)表格分析，經(jīng)BamHⅠ酶切后得到的DNA片段不可以（“可以”或“不可以”）與經(jīng)HindⅢ酶切后的產(chǎn)物連接，理由是產(chǎn)生的粘性末端不同．
（3）用圖中質(zhì)粒和目的基因構(gòu)建重組質(zhì)粒，應(yīng)選用兩種限制酶切割，即BelⅠ酶和HindⅢ．酶切后的載體和目的基因片段，通過(guò)DNA連接酶酶作用后獲得重組質(zhì)粒．為了擴(kuò)增重組質(zhì)粒，需將其轉(zhuǎn)入處于感受態(tài)的大腸桿菌．
（4）轉(zhuǎn)入了重組質(zhì)粒的大腸桿菌可在添加了四環(huán)素的培養(yǎng)基表面長(zhǎng)出菌落．若用PCR鑒定，所用的引物組成為圖2中引物甲和引物丙．

Answer 1

分析 基因工程技術(shù)的基本步驟：
1、目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫(kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成．
2、基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等．
3、將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法．
4、目的基因的檢測(cè)與鑒定：
（1）分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．
（2）個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲(chóng)鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）質(zhì)粒載體作為基因工程的工具，應(yīng)具備的基本條件有具有標(biāo)記基因、具有一個(gè)或多個(gè)限制酶切點(diǎn)、能在受體細(xì)胞中復(fù)制并穩(wěn)定保存．
（2）根據(jù)表格分析，經(jīng)BamHⅠ酶切后得到的DNA片段不可以與經(jīng)HindⅢ酶切后的產(chǎn)物連接，理由是產(chǎn)生的粘性末端不同．
（3）選擇的限制酶應(yīng)在目的基因兩端存在識(shí)別位點(diǎn)，但BamHⅠ可能使質(zhì)粒中的啟動(dòng)子丟失，因此只能選BelI和HindⅢ兩種限制酶切割．酶切后的載體和目的基因片段，通過(guò)連接酶作用后獲得重組質(zhì)粒．為了擴(kuò)增重組質(zhì)粒，需將其轉(zhuǎn)入處于感受態(tài)的大腸桿菌．
（4）為了篩選出轉(zhuǎn)入了重組質(zhì)粒的大腸桿菌，根據(jù)質(zhì)粒上的抗性基因，應(yīng)在篩選平板培養(yǎng)基中添加四環(huán)素．PCR技術(shù)要求兩種引物分別和目的基因的兩條單鏈結(jié)合，沿相反的方向合成子鏈，故所用的引物組成為圖2中引物甲和引物丙．
故答案為：
（1）具有標(biāo)記基因、具有一個(gè)或多個(gè)限制酶切點(diǎn)、能在受體細(xì)胞中復(fù)制并穩(wěn)定保存
（2）不可以  產(chǎn)生的粘性末端不同
（3）HindⅢDNA連接酶  感受
（4）四環(huán)素  引物甲和引物丙

點(diǎn)評(píng) 本題考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的原理及操作步驟，掌握各操作步驟的相關(guān)細(xì)節(jié)，能結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確答題，屬于考綱應(yīng)用和理解層次的考查．