Question

12．正常細(xì)胞中含有抑癌的P53基因，能表達(dá)抗病毒蛋白，幫助修復(fù)輕度變異的基因，也能使重復(fù)變異的細(xì)胞發(fā)生凋亡而避免腫瘤的發(fā)生；若它失活而不能表達(dá)，則基因突變的細(xì)胞易形成腫瘤．基因治療腫瘤是根本的方法，腺病毒以其嗜好增殖細(xì)胞和對人體基本無害而成為良好的基因載體．野生型腺病毒含有抑制P53基因活性的55Kda基因，以及病毒復(fù)制基因E1，因此需要重新構(gòu)建有療效的、安全的腺病毒．圖甲、乙中箭頭所指為相應(yīng)限制酶切點(diǎn)．

（1）人體DNA的一條脫氧核苷酸鏈中相鄰兩個(gè)堿基之間依次由脫氧核糖--磷酸---脫氧核糖連接．
（2）DNA解旋酶直接作用于脫氧核苷酸之間的氫鍵（化學(xué)鍵）；DNA限制酶直接作用于脫氧核苷酸之間的磷酸二酯鍵（化學(xué)鍵）．
（3）構(gòu)建重組腺病毒時(shí)，限制酶最好選擇EcoRI和BamHI，理由是：既可以去除E1 基因以防止病毒復(fù)制后損傷健康細(xì)胞，同時(shí)還能破壞55kda基因以防止其抑制P53基因的活性．
（4）將目的基因與腺病毒重組時(shí)，重組的成功率較低，依然還有大量非重組的野生型病毒的DNA，這是因?yàn)镈NA對所連接的DNA片段沒有選擇性，導(dǎo)致切下片段可能和原DNA連接．
（5）某DNA分子片段含有1000個(gè)堿基對．經(jīng)擴(kuò)增后，分別只用限制酶EcoRⅠ與同時(shí)用EcoRⅠ和HalⅢ兩種方法切割，其電泳結(jié)果如圖丙所示，可推斷限制酶HalⅢ在該DNA片段上的切點(diǎn)有2個(gè)．

Answer 1

分析 分析題圖：圖甲為野生型腺病毒DNA，其中含有抑制P53基因活性的55Kda基因，以及病毒復(fù)制基因E1，因此構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)應(yīng)破壞或去除55Kda基因和基因E1；圖乙為人體DNA片段，其中P53基因?yàn)槟康幕�因．要獲得目的基因（P53基因），同時(shí)還要破壞或去除55Kda基因和基因E1，應(yīng)選用EcoRI和BamHI切割載體和含有目的基因的DNA．

解答 解：（1）根據(jù)DNA分子結(jié)構(gòu)可知，人體DNA的一條脫氧核苷酸鏈中相鄰兩個(gè)堿基之間依次由脫氧核糖--磷酸---脫氧核糖連接．
（2）DNA解旋酶直接作用于脫氧核苷酸之間的氫鍵；DNA限制酶直接作用于脫氧核苷酸之間的磷酸二酯鍵．
（3）根據(jù)題干信息“野生型腺病毒含有抑制P53基因活性的55Kda基因，以及病毒復(fù)制基因E1”可知，構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，應(yīng)選用EcoRI和BamHI切割載體和含有目的基因的DNA，這樣既可以去除E1基因以防止病毒復(fù)制后損傷健康細(xì)胞，同時(shí)還能破壞55Kda基因以防止其抑制P53基因的活性．
（4）由于切下片段有可能與原基因重新結(jié)合，因此將目的基因與腺病毒重組時(shí)，重組的成功率較低，依然還有大量非重組的野生型病毒的DNA．
（5）只用限制酶EcoRI切割能產(chǎn)生700kb、200kb和100kb三種長度的DNA片段，同時(shí)用EcoRI和HalⅢ兩種酶切割可產(chǎn)生420kb、280kb和100kb三種長度的DNA片段，可見，限制酶HalⅢ又將長度為700Kb的DNA片段切成420kb和280kb兩段，將長度為200kb的DNA片段切成100kb的兩段，由此可推斷限制酶HalⅢ在該DNA片段上的切割位點(diǎn)有2個(gè)．
故答案為：
（1）脫氧核糖--磷酸---脫氧核糖
（2）氫      磷酸二酯鍵
（3）EcoRI和BamHI     E1        55kda        抑制P53基因的活性
（4）DNA對所連接的DNA片段沒有選擇性，導(dǎo)致切下片段可能和原DNA連接 
（5）2

點(diǎn)評 本題結(jié)合圖解，考查基因工程的技術(shù)和原理，要求考生識(shí)記基因工程的工具及操作步驟，能根據(jù)圖甲和圖乙中的限制酶分布位點(diǎn)及題干信息“野生型腺病毒含有抑制P53基因活性的55Kda基因，以及病毒復(fù)制基因E1”選擇合適的限制酶；能根據(jù)電泳結(jié)果圖推斷限制酶HalⅢ切割位點(diǎn)數(shù)目．