Question

10．綠色熒光蛋白（GFP）會發(fā)出綠色熒光，該蛋白質(zhì)在生物工程中有著廣闊的應用前景．請據(jù)圖回答相關(guān)問題：

（1）形成重組質(zhì)粒時，如果限制性內(nèi)切酶Ⅰ的識別序列和切點是一G↓GATCC一，限制性內(nèi)切酶Ⅱ的識別序列和切點是一↓GATC一．在質(zhì)粒上有酶Ⅰ的一個切點，在目的基因兩側(cè)各有一個酶Ⅱ的切點．在DNA連接酶和上述兩種不同限制酶的作用下，能否將質(zhì)粒和目的基因連接起來？可以連接理由是由兩種不同限制酶切割后形成的黏性末端相同（可互補）．
（2）構(gòu)建重組質(zhì)粒時，限制酶切點應位于啟動子和終止子之間，保證綠色熒光蛋白基因的正常表達．寫出該基因表達過程包含的信息傳遞圖解：．
（3）在②過程進行轉(zhuǎn)基因體細胞的篩選時的方法是轉(zhuǎn)基因細胞發(fā)出綠色熒光．
（4）在核移植過程中，乙兔提供的細胞應是減數(shù)第二次分裂中期（次級）卵母細胞．
（5）通過推測氨基酸排序，可以找到對應脫氧核苷酸序列，造出能吸收、發(fā)出不同顏色光的熒光蛋白，并能讓它們發(fā)光更久、更強烈．

Answer 1

分析 分析圖解，可以看出該熒光克隆兔涉及了多項生物工程技術(shù)．首先導入目的基因的甲兔的成纖維細胞要經(jīng)過動物細胞培養(yǎng)篩選出轉(zhuǎn)基因體細胞，然后該細胞與乙兔的卵細胞進行細胞核移植獲得重組細胞，重組細胞經(jīng)過早期胚胎培養(yǎng)到桑葚胚或囊胚期，最后經(jīng)過胚胎移植技術(shù)將早期胚胎移植到代孕母兔子宮內(nèi)，最后生成熒光克隆兔．該過程中利用基因工程、動物細胞培養(yǎng)、細胞核移植、早期胚胎培養(yǎng)和胚胎移植等技術(shù)．

解答 解：（1）①限制性內(nèi)切酶Ⅰ的識別序列和切點是-G^↓GATCC-，因此質(zhì)粒被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端為：．
②限制性內(nèi)切酶Ⅱ的識別序列和切點是-^↓GATC-，因此目的基因兩側(cè)被限制酶Ⅱ切割后所形成的黏性末端為：．
③限制性內(nèi)切酶Ⅰ和限制性內(nèi)切酶Ⅱ的識別序列和切點不同，但兩種切割形成的黏性末端相同，因此可在DNA連接酶的作用下連接起來，形成重組DNA分子$\frac{\underline{\;GGATC\;}}{CCTAG}$和$\frac{\underline{\;GATCC\;}}{CTAGG}$．
（2）啟動子是RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位，能驅(qū)動基因轉(zhuǎn)錄出mRNA，終止子的作用是使轉(zhuǎn)錄在所需要的地方停止，所以構(gòu)建重組質(zhì)粒時，限制酶切點應位于啟動子和終止子之間，保證綠色熒光蛋白基因的正常表達．該基因表達過程包含的信息傳遞圖解：．
（3）在②過程進行轉(zhuǎn)基因體細胞的篩選時，比較簡易的篩選方法是轉(zhuǎn)基因細胞能否發(fā)出綠色熒光．
（4）在核移植過程中，乙兔提供的細胞應是減數(shù)第二次分裂中期（次級）卵母細胞．
（5）通過推測氨基酸排序，可以找到 對應脫氧核苷酸序列，造出能吸收、發(fā)出不同顏色光的熒光蛋白，并能讓它們發(fā)光更久、更強烈．
故答案為：
（1）可以連接                    由兩種不同限制酶切割后形成的黏性末端相同（可互補）
（2）啟動子               終止子

（3）轉(zhuǎn)基因細胞發(fā)出綠色熒光
（4）減數(shù)第二次分裂中期（次級）卵母細胞
（5）對應脫氧核苷酸序列

點評 本題考查基因工程、細胞核移植技術(shù)、蛋白質(zhì)工程的相關(guān)知識，意在考查學生理解所學知識的要點；能運用所學知識，分析問題的能力及從圖中獲取相關(guān)的信息的能力．