Question

1．回答下列有關(guān)基因工程的問(wèn)題：
（1）構(gòu)建基因工程表達(dá)載體時(shí)，用不同類型的限制酶切割DNA后，可能產(chǎn)生黏性末端，也可能產(chǎn)生平末端．若要在限制酶切割目的基因和質(zhì)粒后使其直接進(jìn)行連接，則應(yīng)選擇能使二者產(chǎn)生相同（填“相同”或“不同”）黏性末端的限制酶．
（2）利用大腸桿菌生產(chǎn)人胰島素時(shí)，構(gòu)建的表達(dá)載體含有人胰島素基因及其啟動(dòng)子等，其中啟動(dòng)子的作用是驅(qū)動(dòng)胰島素基因轉(zhuǎn)錄出mRNA．在用表達(dá)載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌時(shí)，常用CaCl₂溶液（或Ca²⁺）處理大腸桿菌，使細(xì)胞處于一種能吸收周?chē)�環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)，這種細(xì)胞稱為感受態(tài)細(xì)胞；為了檢測(cè)胰島素基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA，可用標(biāo)記的胰島素基因片段作探針與mRNA雜交，該雜交技術(shù)稱為分子雜交技術(shù)．為了檢測(cè)胰島素基因轉(zhuǎn)錄的mRNA是否翻譯成蛋白質(zhì)，常用抗原-抗體雜交技術(shù)．
（3）如果要將某目的基因通過(guò)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法導(dǎo)入植物細(xì)胞，先要將目的基因插入農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒的T-DNA中，然后用該農(nóng)桿菌感染植物細(xì)胞，通過(guò)DNA重組將目的基因插入植物細(xì)胞的染色體DNA上，使目的基因的遺傳特性得以穩(wěn)定維持和表達(dá)．

Answer 1

分析 基因表達(dá)載體的組成：目的基因+啟動(dòng)子+終止子+標(biāo)記基因．
啟動(dòng)子是RNA聚合酶特異性識(shí)別和結(jié)合的DNA序列，是基因的一個(gè)組成部分，控制基因表達(dá)（轉(zhuǎn)錄）的起始時(shí)間和表達(dá)的程度．
終止子是給予RNA聚合酶轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)的DNA序列．
目的基因分子水平上的檢測(cè)：
①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)
②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)
③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)

解答 解：（1）限制酶能夠識(shí)別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷裂，形成黏性末端和平末端兩種．若要在限制酶切割目的基因和質(zhì)粒后使其直接進(jìn)行連接，則應(yīng)選擇能使二者產(chǎn)生相同黏性末端的限制酶．
（2）啟動(dòng)子是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的位點(diǎn)，有了它才能驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出mRNA，最終獲得所需要的蛋白質(zhì)．在用表達(dá)載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌時(shí)，常用Ca²⁺處理大腸桿菌，使大腸桿菌變成感受態(tài)細(xì)胞，以利于表達(dá)載體進(jìn)入；為了檢測(cè)胰島素基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA，可用標(biāo)記的胰島素基因片段作探針與mRNA雜交，該雜交技術(shù)稱為DNA分子雜交技術(shù)．為了檢測(cè)胰島素基因轉(zhuǎn)錄的mRNA是否翻譯成人胰島素，常用抗原-抗體雜交技術(shù)．
（3）如果要將某目的基因通過(guò)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法導(dǎo)入植物細(xì)胞，先要將目的基因插入農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒的T-DNA中，然后用該農(nóng)桿菌感染植物細(xì)胞，通過(guò)DNA重組將目的基因插入植物細(xì)胞的染色體的DNA上，使目的基因的遺傳特性得以穩(wěn)定維持和表達(dá)．
故答案為：
（1）平　相同
（2）驅(qū)動(dòng)胰島素基因轉(zhuǎn)錄出mRNA　CaCl₂溶液（或Ca²⁺）　感受態(tài)     分子雜交技術(shù)　蛋白質(zhì)
（3）T-DNA　染色體DNA    表達(dá)

點(diǎn)評(píng) 本題考查了基因工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生能夠識(shí)記限制酶的作用特點(diǎn)和作用結(jié)果；識(shí)記啟動(dòng)子的功能；識(shí)記目的基因分子水平上檢測(cè)的方法；識(shí)記農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法的相關(guān)過(guò)程等，難度適中，屬于考綱中識(shí)記、理解層次的考查．