Question

4．某生物興趣小組試圖探究牛和山羊的瘤胃中的微生物對(duì)尿素是否有分解作用，設(shè)計(jì)了以下實(shí)驗(yàn)，并成功篩選到能降解尿素的細(xì)菌（目的菌）．培養(yǎng)基成分如表所示，實(shí)驗(yàn)步驟如圖所示．請(qǐng)分析回答問(wèn)題：

KH2PO4	1.4g
Na2HPO4	2.1g
MgSO4•7H2O	0.2g
葡萄糖	10g
尿素	1g
瓊脂	15g
溶解后自來(lái)水定容到1000mL

（1）從培養(yǎng)基的物理性質(zhì)分析，該培養(yǎng)基屬于固體培養(yǎng)基；從培養(yǎng)基的用途分析，該培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基．
（2）在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中：①培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿；②玻棒、試管、錐形瓶、吸管；③瘤胃中液體；④涂布器．其中需要滅菌是①、②、④（填序號(hào)）．
（3）分離分解尿素的細(xì)菌實(shí)驗(yàn)時(shí)，甲同學(xué)從培養(yǎng)基上篩選出大約150個(gè)菌落，而其他同學(xué)只選擇出大約50個(gè)菌落．甲同學(xué)堅(jiān)信自己的實(shí)驗(yàn)結(jié)果是準(zhǔn)確的，則甲同學(xué)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生差異的原因最可能是①（填序號(hào)）
①取樣不同    ②培養(yǎng)基污染     ③操作失誤    ④沒(méi)有設(shè)置對(duì)照
（4）為確定實(shí)驗(yàn)中微生物屬于尿素分解菌，可在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，若菌落變成紅色，說(shuō)明瘤胃中的微生物能分解酵素．理由是細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解成氨，PH增高，使酚紅指示劑變紅．
（5）為進(jìn)一步確定取自瘤胃中液體的適當(dāng)稀釋倍數(shù)，將接種的培養(yǎng)皿放置在37°C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h～48h，觀(guān)察并統(tǒng)計(jì)具有紅色環(huán)帶的菌落數(shù)，結(jié)果如表，其中10⁶或10⁵倍的稀釋比較合適．

稀釋倍數(shù)	103	104	105	106	107
菌落數(shù)	＞500	367	248	36	18

（6）若要在右圖實(shí)驗(yàn)中對(duì)瘤胃中的目的菌進(jìn)行計(jì)數(shù)，應(yīng)采用什么計(jì)數(shù)法？活菌計(jì)數(shù)法（或間接計(jì)數(shù)法），該方法的缺點(diǎn)是容易導(dǎo)致結(jié)果偏小，請(qǐng)寫(xiě)出結(jié)果偏小的原因兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞可能共同形成一個(gè)菌落，導(dǎo)致結(jié)果偏�。ㄒ恍┘�(xì)菌在培養(yǎng)過(guò)程中死亡后，不能形成菌落，導(dǎo)致結(jié)果偏�。�．（寫(xiě)出一項(xiàng)即可）

Answer 1

分析 1、微生物常見(jiàn)的接種的方法
①平板劃線(xiàn)法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線(xiàn)，在恒溫箱里培養(yǎng)．在線(xiàn)的開(kāi)始部分，微生物往往連在一起生長(zhǎng)，隨著線(xiàn)的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個(gè)菌落．
②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過(guò)大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個(gè)菌落．
2、選擇培養(yǎng)基是在培養(yǎng)基中加入相應(yīng)的特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)或化學(xué)物質(zhì)，抑制不需要的微生物的生長(zhǎng)，有利于所需微生物的生長(zhǎng)．
3、消毒和滅菌

	消毒	滅菌
概念	使用較為溫和的物理或化學(xué)方法殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物（不包芽孢和孢子）	使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所用的微生物（包括芽孢和孢子）
常用方法	煮沸消毒法、巴氏消毒法、化學(xué)藥劑消毒法、紫外線(xiàn)消毒法	灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌
適用對(duì)象	操作空間、某些液體、雙手等	接種環(huán)、接種針、玻璃器皿、培養(yǎng)基等

解答 解：（1）分析表格，培養(yǎng)基成分中含有瓊脂作為凝固劑，因此從培養(yǎng)基的物理性質(zhì)分析，該培養(yǎng)基屬于固體培養(yǎng)基；并且培養(yǎng)基中加入尿素為唯一氮源，因此從培養(yǎng)基的用途分析，該培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基．
（2）在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，①培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿，②玻棒、試管、錐形瓶、吸管，④涂布器需要滅菌處理，而③瘤胃中液體如果經(jīng)過(guò)滅菌將使其中的微生物全部死亡．
（3）根據(jù)題意可知，甲同學(xué)堅(jiān)信自己的實(shí)驗(yàn)結(jié)果是準(zhǔn)確的，則甲同學(xué)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生差異的原因最可能是取樣不同．
（4）細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解成氨，PH增高，使酚紅指示劑變紅，因此以通過(guò)在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，檢測(cè)培養(yǎng)基pH的變化來(lái)判斷尿素是否被分解．
（5）觀(guān)察并統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)應(yīng)選30-300之間的培養(yǎng)皿進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，故應(yīng)選10⁶或10⁵倍的稀釋比較合適．
（6）若要在右圖實(shí)驗(yàn)中對(duì)瘤胃中的目的菌進(jìn)行計(jì)數(shù)，應(yīng)采用活菌計(jì)數(shù)法（或間接計(jì)數(shù)法），兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞可能共同形成一個(gè)菌落，導(dǎo)致結(jié)果偏�。�
故答案為：
（1）固體培養(yǎng)基       選擇培養(yǎng)基   
（2）①、②、④
（3）①
（4）紅      細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解成氨，PH增高，使酚紅指示劑變紅
（5）10⁶或10⁵
（6）活菌計(jì)數(shù)法（或間接計(jì)數(shù)法）     兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞可能共同形成一個(gè)菌落，導(dǎo)致結(jié)果偏小（一些細(xì)菌在培養(yǎng)過(guò)程中死亡后，不能形成菌落，導(dǎo)致結(jié)果偏小）

點(diǎn)評(píng) 本題是對(duì)用于微生物培養(yǎng)的培養(yǎng)基的配方及營(yíng)養(yǎng)成分、選擇培養(yǎng)基的選擇作用、常用的接種方法、無(wú)菌操作技術(shù)、對(duì)分解尿素的菌的鑒定等相關(guān)知識(shí)的綜合性考查，回憶微生物培養(yǎng)的培養(yǎng)基的配方和營(yíng)養(yǎng)成分、選擇培養(yǎng)基的選擇作、常用的接種方法的具體操作和目的，無(wú)菌操作技術(shù)、對(duì)分解尿素的菌的鑒然后結(jié)合問(wèn)題進(jìn)行解答．