Question

11．人的血清白蛋白（HSA）在臨床上需求量很大，通常從人血中提取．但由于艾滋病病毒等人類感染性病原體造成的威脅與日俱增，使人們對(duì)血液制品顧慮重重．如果應(yīng)用基因工程將人的血清白蛋白基因轉(zhuǎn)入奶牛細(xì)胞中，那么利用牛的乳腺細(xì)胞生產(chǎn)血清白蛋白就成為可能．下圖表示利用乳腺生物反應(yīng)器生產(chǎn)人血清白蛋白的過程，圖中Tet^r表示四環(huán)素抗性基因，Amp^r表示氨芐青霉素抗性基因，五種限制酶的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)如表所示，請(qǐng)回答以下問題：

限制酶	BamHⅠ	HaeⅢ	BclⅠ	Sau3AⅠ	NotⅠ
識(shí)別序列及切割位點(diǎn)

（1）構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，需要將人血清白蛋白基因嵌入到啟動(dòng)子和終止子之間，這樣人血清白蛋白基因就能在乳腺細(xì)胞中表達(dá)．
（2）要將人血清白蛋白基因插入質(zhì)粒中，若只允許使用一種限制酶，那么應(yīng)選擇的限制酶是Sau3AⅠ．
（3）據(jù)圖分析，篩選含有重組質(zhì)粒的受體細(xì)胞首先需要在含氨芐青霉素（填“四環(huán)素”或“氨芐青霉素”或“四環(huán)素或氨芐青霉素”）的培基上進(jìn)行，原因是用限制酶切割后破壞了Tet^r基因，但不會(huì)破壞Amp^r基因，導(dǎo)入重組質(zhì)粒的受體細(xì)胞（對(duì)氨芐青霉素具有抗性），能在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上生存下來．
（4）若BamH I酶切的DNA末端與Bcl I酶切的DNA末端連接起來，連接部位的6個(gè)堿基對(duì)序列為，對(duì)于該部位，這兩種酶都不能（“都不能”或“只有一種能”）切開．
（5）為了獲得母奶牛，胚胎移植前需對(duì)已成功轉(zhuǎn)入目的基因的胚胎進(jìn)行性別鑒定．若要檢測(cè)牛奶中是否含有人血清白蛋白，可采用抗原-抗體雜交技術(shù)．

Answer 1

分析 分析題圖：圖示表示利用乳腺生物反應(yīng)器生產(chǎn)人血清白蛋白的過程，其中①表示將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞的過程；②表示早期胚胎培養(yǎng)過程；③表示胚胎移植過程；④表示妊娠形成轉(zhuǎn)基因牛；⑤表示從轉(zhuǎn)基因牛的乳汁中獲取人血清白蛋白．

解答 解：（1）啟動(dòng)子啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄過程，終止子終止轉(zhuǎn)錄過程，因此構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，需要將人乳鐵蛋白基因嵌入到啟動(dòng)子和終止子之間，這樣人乳鐵蛋白基因就能在乳腺細(xì)胞中表達(dá)．
（2）根據(jù)表中五種酶的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)可知，限制酶Sau3AI還可以切割限制酶BstⅠ和限制酶BamHⅠ的識(shí)別序列，因此要將人乳蛋白基因插入載體，在只允許用一種限制酶酶切載體和人乳鐵蛋白基因的情況下，應(yīng)選擇限制酶Sau3AI．
（3）據(jù)用限制酶Sau3AI切割后會(huì)破壞四環(huán)素抗性基因，但不會(huì)破壞氨芐青霉素抗性基因，因此倒入重組質(zhì)粒的受體細(xì)胞可能在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上生存下來．
（4）根據(jù)表格中各種限制酶的識(shí)別序列和切割位點(diǎn)可知，若BamH I酶切的DNA末端與Bcl I酶切的DNA末端連接起來，連接部位的6個(gè)堿基對(duì)序列為 ，對(duì)于該部位，這兩種酶都不能切開．
（5）為了獲得母奶牛，胚胎移植前需對(duì)已成功轉(zhuǎn)入目的基因的胚胎進(jìn)行性別鑒定．檢測(cè)目的基因是否表達(dá)產(chǎn)生相應(yīng)的蛋白質(zhì)可采用抗原-抗體雜交技術(shù)．
故答案為：
（1）啟動(dòng)子和終止子  
（2）Sau3AⅠ
（3）氨芐青霉素     用限制酶切割后破壞了Tet^r基因，但不會(huì)破壞Amp^r基因，導(dǎo)入重組質(zhì)粒的受體細(xì)胞（對(duì)氨芐青霉素具有抗性），能在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上生存下來
（4）    都不能
（5）性別鑒定      抗原-抗體雜交

點(diǎn)評(píng) 本題結(jié)合圖表，考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的操作工具及其特點(diǎn)；識(shí)記基因工程的操作步驟，掌握其應(yīng)用，能根據(jù)圖中和表中信息選擇合適的限制酶，再結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確答題．