Question

6．分析回答下列微生物及其培養(yǎng)問題
農(nóng)業(yè)上廣泛使用的除草劑在土壤中不易被分解，長期使用會污染土壤．為了修復(fù)被污染的土壤，可按圖程序選育出能降解該除草劑的細(xì)菌．（注：已知該除草劑是一種含氮有機(jī)物；含一定量該除草劑的培養(yǎng)基不透明．）

（1）微生物培養(yǎng)過程中需要的營養(yǎng)物質(zhì)主要有碳源、氮源、生長因子、無機(jī)鹽、水．
（2）培養(yǎng)基的配制主要包括如下步驟：①溶化，②調(diào)pH，③高溫高壓滅菌，④稱量．這些步驟正確的順序是④①②③．
（3）實驗中進(jìn)行平板劃線操作（如圖乙、丙所示）的目的是將聚集的微生物逐步分離（獲得單個的菌落，分離純化菌種）．在具體操作時，首先要將接種環(huán)通過（填編號）②（①紫外線；②酒精燈灼燒；③高溫高壓）滅菌；第二次及以后的劃線，總是從上一次劃線的末端開始．
（4）為了選育出能降解除草劑的細(xì)菌，在配置培養(yǎng)基時需添加一定量的該型除草劑，并以該型除草劑作為唯一氮源（營養(yǎng)來源），其原因是只有能利用除草劑的微生物才能在該培養(yǎng)基上正常生長和繁殖．
（5）如果篩選能降解該型除草劑的細(xì)菌結(jié)果如圖丁所示（A-E分別表示不同的菌株），其中的B、D菌株周圍無透明圈形成，說明菌株B和菌株D不能分解除草劑（利用其中的氮）；如果從A-E菌株中選育高效的能降解該型除草劑的細(xì)菌，應(yīng)選育菌株E．
（6）實驗中采用稀釋涂布平板法檢測水樣中的細(xì)菌含量．將1mL水樣稀釋100倍，在3個平板上用涂布法分別接入0.1mL稀釋液；經(jīng)適當(dāng)培養(yǎng)后，3個平板上的菌落數(shù)分別為39、38和37．據(jù)此可得出每升水樣中的活菌數(shù)為3.8×10⁷．
（7）為探究此除草劑的降解機(jī)制，將該菌種的培養(yǎng)液過濾離心，取上清液作圖戊所示實驗．該實驗的假設(shè)是目的菌株能分泌降解苯磺隆的蛋白質(zhì)；該實驗設(shè)計缺少對照處理，正確的對照處理是上清液中不加蛋白酶溶液（或加等量的無菌水），再測定除草劑的降解率．

Answer 1

分析 1、消毒和滅菌：

	消毒	滅菌
概念	使用較為溫和的物理或化學(xué)方法殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物（不包芽孢和孢子）	使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所用的微生物（包括芽孢和孢子）
常用方法	煮沸消毒法、巴氏消毒法、化學(xué)藥劑消毒法、紫外線消毒法	灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌
適用對象	操作空間、某些液體、雙手等	接種環(huán)、接種針、玻璃器皿、培養(yǎng)基等

2、分析題圖：該實驗是從土壤中篩選分離能降解除草劑的微生物的過程．該實驗要將土壤稀釋處理，以除草劑為唯一氮源的培養(yǎng)基篩選土壤微生物，以菌落計數(shù)法進(jìn)行統(tǒng)計計數(shù)．

解答 解：（1）微生物培養(yǎng)過程中需要的營養(yǎng)物質(zhì)主要有碳源、氮源、生長因子、無機(jī)鹽、水．
（2）培養(yǎng)基的配置過程：計算、稱量、溶化、調(diào)pH、滅菌、倒平板．
（3）平板劃線操作的目的是將聚集的微生物逐步分離（獲得單個的菌落，分離純化菌種）．每次劃線前和結(jié)束時都需要對接種環(huán)進(jìn)行灼燒滅菌．劃線時，第二次及以后的劃線，總是從上一次劃線的末端開始，原因是每次劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個細(xì)菌繁殖而來的菌落．
（4）選育能降解除草劑的細(xì)菌時，應(yīng)該用含有該型除草劑作為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基，因為只有能利用除草劑的微生物才能在該培養(yǎng)基上正常生長和繁殖．
（5）B、D菌株周圍無透明圈形成，說明菌株B和菌株D不能分解除草劑（利用其中的氮）；菌株E周圍的透明圈最大，說明其降解該型除草劑的能力最強(qiáng)，因此應(yīng)選育菌株E．
（6）將1mL水樣稀釋100倍，在3個平板上用涂布法分別接入0.1mL稀釋液；經(jīng)適當(dāng)培養(yǎng)后，3個平板上的菌落數(shù)分別為39、38和37．據(jù)此可得出每升水樣中的活菌數(shù)為$\frac{39+38+37}{3}×10×100×1000$=3.8×10⁷．
（7）該實驗設(shè)計缺少對照處理，正確的對照處理是上清液中不加蛋白酶溶液（或加等量的無菌水），再測定除草劑的降解率．
故答案為：
（1）碳源、氮源、生長因子、無機(jī)鹽、水
（2）④①②③
（3）將聚集的微生物逐步分離（獲得單個的菌落，分離純化菌種） ②上一次劃線的末端
（4）唯一氮源     只有能利用除草劑的微生物才能在該培養(yǎng)基上正常生長和繁殖
（5）菌株B和菌株D不能分解除草劑（利用其中的氮）     E
（6）3.8×10⁷
（7）上清液中不加蛋白酶溶液（或加等量的無菌水），再測定除草劑的降解率

點評 本題考查微生物的分離和培養(yǎng)，要求考生識記無菌技術(shù)，掌握消毒和滅菌的區(qū)別；識記接種微生物常用的方法，能結(jié)合圖中信息準(zhǔn)確答題，屬于考綱識記和理解層次的考查．