Question

14．農(nóng)田中某種除草劑（含舫機(jī)物）在土壤中不易降解，長(zhǎng)期使用造成土壤污染．為修復(fù)被除草劑污染的土壤，可按如圖程序篩選能降解該除草劑的細(xì)菌（已知該除草劑在水中溶解度一定，含該除草劑的培養(yǎng)基不透明）．

（1）制備土壤浸出液時(shí)，為避免菌體濃度過(guò)高，需將溶液進(jìn)行稀釋處理．
（2）要從長(zhǎng)期使用該除草劑的土壤中分離目的菌，上圖B、C、D中所用培養(yǎng)基根據(jù)物理性質(zhì)劃分屬于固體培養(yǎng)基，配方中應(yīng)以該除草劑為唯一氮源；可配置牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基作為對(duì)照．
（3）據(jù)圖C，在上述實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程中，接種環(huán)在酒精燈火焰上灼燒滅菌共6（填“5”、“6”或“7”）次．培養(yǎng)后發(fā)現(xiàn)，與牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基相比，上圖所示培養(yǎng)基中只有很少菌落出現(xiàn)，大部分細(xì)菌在此培養(yǎng)基上不能生長(zhǎng)的原因是不能利用該除草劑作為氮源．
（4）D圖中，無(wú)透明圈的菌落可能是固氮菌（填“硝化細(xì)菌”、“固氮菌”或“尿素分解菌”）；有透明圈的菌落，透明圈形成的原因是該除草劑被分解．

Answer 1

分析 1、分析題圖：該實(shí)驗(yàn)是從土壤中篩選分離能降解除草劑的微生物的過(guò)程．這樣的實(shí)驗(yàn)要將土壤稀釋處理，用以除草劑為唯一氮源的培養(yǎng)基進(jìn)行篩選．
2、采用平板劃線法接種時(shí)，在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)，在劃線操作結(jié)束時(shí)，仍然需要灼燒接種環(huán)．

	第一次灼燒	每次劃線之前灼燒	劃線結(jié)束灼燒
目的	避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)基	殺死上次劃線結(jié)束后接種環(huán)上殘留的菌種	殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染或感染操作者

②在灼燒接種環(huán)之后，要等其冷卻后再進(jìn)行劃線，以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種．
③在進(jìn)行第二次以及其后的劃線操作時(shí)'要從上一次劃線的末端開(kāi)始劃線．每次劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開(kāi)始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來(lái)的菌落．

解答 解：（1）制備土壤浸出液時(shí)，為避免菌體濃度過(guò)高，需將溶液進(jìn)行稀釋處理．
（2）要從長(zhǎng)期使用該除草劑的土壤中分離目的菌，上述培養(yǎng)皿中培養(yǎng)基的特點(diǎn)是：固體培養(yǎng)基且以除草劑作唯一氮源．若需要調(diào)節(jié)培養(yǎng)基pH，應(yīng)該在各種成分都溶化后且分裝前進(jìn)行．可配置牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基作為空白對(duì)照．
（3）在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)，在劃線操作結(jié)束時(shí)，仍然需要灼燒接種環(huán)．圖C中共劃線5個(gè)區(qū)域，因此接種環(huán)在酒精燈火焰上灼燒滅菌共6次．培養(yǎng)后發(fā)現(xiàn)，與牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基相比，上圖所示培養(yǎng)基中只有很少菌落出現(xiàn)，大部分細(xì)菌在此培養(yǎng)基上不能生長(zhǎng)的原因是不能利用該除草劑作為氮源．
（4）該培養(yǎng)基以除草劑為唯一氮源，透明圈形成的原因是除草劑被分解，此處的菌落是除草劑分解細(xì)菌形成的；無(wú)透明圈的菌落不能分解培養(yǎng)基中的除草劑，但能利用大氣中的氮，說(shuō)明其可能是固氮菌．
故答案為：
（1）稀釋
（2）固體       唯一氮源         對(duì)照
（3）6        不能利用該除草劑作為氮源
（4）固氮菌     該除草劑被分解

點(diǎn)評(píng) 本題考查微生物的分離和培養(yǎng)，要求考生識(shí)記接種微生物常用的兩種方法；掌握培養(yǎng)基的基本成分、種類及功能；掌握平板劃線的基本操作，能結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確答題．