Question

7．基因工程自20世紀(jì)70年代興起后，目前巳成為生物科學(xué)的核心技術(shù)，并在實(shí)際領(lǐng)域--農(nóng)牧業(yè)、工業(yè)、環(huán)境、能源和醫(yī)藥衛(wèi)生等方面，也展示出美好的前景．請回答下列有關(guān)基因工程的問題．
（1）基因工程操作的核心步驟是基因表達(dá)載體的構(gòu)建．若選擇的限制酶切出的DNA片段是平末端，應(yīng)選擇T₄DNA連接酶進(jìn)行連接．
（2）將目的基因?qū)�入到植物�?xì)胞采用最常用的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，該方法通常要把目的基因插入Ti質(zhì)粒的T-DNA中，這是利用T-DNA可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞并整合到受體細(xì)胞的染色體DNA上的功能．
（3）在基因工程操作中，若要在短時(shí)間內(nèi)大量獲取目的基因，可用PCR技術(shù)擴(kuò)增DNA．該技術(shù)的原理是DNA（雙鏈）復(fù)制．

Answer 1

分析 基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成．
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動子、終止子和標(biāo)記基因等．
（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入動物�?xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法．
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）基因工程的基本操作步驟主要包括四步：①目的基因的獲�。虎诨�因表達(dá)載體的構(gòu)建；③將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞；④目的基因的檢測與表達(dá)，其中核心步驟是基因表達(dá)載體的構(gòu)建．E．coliDNA連接酶和T₄DNA連接酶都能連接黏性末端，此外T₄DNA連接酶還可以連接平末端，因此若選擇的限制酶切出的DNA片段是平末端，則應(yīng)選擇T₄DNA連接酶進(jìn)行連接．
（2）將目的基因?qū)�入到植物�?xì)胞常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，該方法通常要把目的基因插入Ti質(zhì)粒的T-DNA中，這是利用T-DNA可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞，并整合到受體細(xì)胞的染色體DNA上的功能．
（3）PCR技術(shù)可在體外大量擴(kuò)增目的基因，其原理是DNA復(fù)制．
故答案為：
（1）基因表達(dá)載體的構(gòu)建      T₄DNA連接酶 
（2）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法     Ti質(zhì)粒     
（3）PCR技術(shù)      DNA（雙鏈）復(fù)制

點(diǎn)評 本題考查基因工程的相關(guān)知識，要求考生識記基因工程的原理、操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細(xì)節(jié)，了解基因工程技術(shù)的相關(guān)應(yīng)用，能結(jié)合所學(xué)的知識準(zhǔn)確答題，屬于考綱識記層次的考查．