Question

17．我國(guó)科學(xué)家獨(dú)立研制的輪狀病毒疫苗對(duì)嬰幼兒感染性腹瀉有很好的預(yù)防效果．輪狀病毒是RNA病毒，表面的E蛋白為主要抗原，下面介紹疫苗生產(chǎn)的有關(guān)過程，回答下列問題：
（1）用輪狀病毒的抗原E蛋白獲得E基因（目的基因）過程需要借助蛋白質(zhì)工程．構(gòu)建完整的表達(dá)載體必須要含有啟動(dòng)子、終止子、復(fù)制原點(diǎn)和目的基因等結(jié)構(gòu)．
（2）生產(chǎn)疫苗時(shí)可用微生物做受體細(xì)胞，則應(yīng)采用Ca²⁺處理微生物細(xì)胞，使受體細(xì)胞處于感受態(tài)，從而將表達(dá)載體導(dǎo)入受體細(xì)胞；疫苗藥物生產(chǎn)也可用乳腺生物反應(yīng)器，那么導(dǎo)入目的基因的方法應(yīng)采用顯微注射．
（3）對(duì)健康幼兒進(jìn)行該傳染病免疫預(yù)防時(shí)，可選用基因工程生產(chǎn)的E蛋白作疫苗．對(duì)該傳染病疑似患者確診時(shí)，可以從疑似患者體內(nèi)分離出病毒，與已知病毒進(jìn)行核酸序列比較；或用抗E蛋白的抗體進(jìn)行特異性結(jié)合檢測(cè)．

Answer 1

分析 基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成．
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等．
（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法．
（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）蛋白質(zhì)工程的基本程序之一是根據(jù)中心法則逆推以確定目的基因的堿基序列，因此用輪狀病毒的抗原E蛋白獲得E基因（目的基因）過程需要借助蛋白質(zhì)工程．基因表達(dá)載體的組成包括啟動(dòng)子、目的基因、標(biāo)記基因和終止子等結(jié)構(gòu)．
（2）將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞常用感受態(tài)轉(zhuǎn)化法，即用Ca²⁺處理微生物細(xì)胞，使受體細(xì)胞處于易于吸收周圍環(huán)境中DNA分子的感受態(tài)，從而將表達(dá)載體導(dǎo)入受體細(xì)胞；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞常用顯微注射法．
（3）對(duì)健康幼兒進(jìn)行該傳染病免疫預(yù)防時(shí)，可選用基因工程生產(chǎn)的E蛋白作疫苗．對(duì)該傳染病疑似患者確診時(shí)，可以從疑似患者體內(nèi)分離出病毒，與已知病毒進(jìn)行核酸序列比較；或采用抗原-抗體雜交法，即用抗E蛋白的抗體進(jìn)行特異性結(jié)合檢測(cè)．
故答案為：
（1）蛋白質(zhì)     啟動(dòng)子、終止子、復(fù)制原點(diǎn)
（2）感受態(tài)   顯微注射
（3）E蛋白     已知病毒進(jìn)行核酸序列      抗E蛋白的抗體

點(diǎn)評(píng) 本題考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的原理、操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細(xì)節(jié)；識(shí)記蛋白質(zhì)工程的基本過程，能結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確答題．