Question

13．質(zhì)粒能成功轉(zhuǎn)入植物細(xì)胞，并將質(zhì)粒上的一部分外源DNA整合到植物的DNA中．圖1表示利用質(zhì)粒進(jìn)行轉(zhuǎn)化獲得抗除草劑大豆的過程．請(qǐng)據(jù)圖分析回答：

（1）過程②需要通過DNA連接酶使質(zhì)粒與目的基因的切口黏合．
（2）組建理想的載體需要對(duì)天然的質(zhì)粒進(jìn)行改造．圖2是天然土壤農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒結(jié)構(gòu)示意圖（圖示為部分基因及部分限制性核酸內(nèi)切酶的作用位點(diǎn)），據(jù)圖分析：
①人工改造時(shí)，要使抗蟲基因表達(dá)，還應(yīng)插入啟動(dòng)子．
②若用限制酶Ⅰ分別切割改造過的理想質(zhì)粒和帶有抗除草劑基因的DNA分子，并構(gòu)建成重組Ti質(zhì)粒．分別以含四環(huán)素和卡那霉素的培養(yǎng)基培養(yǎng)已成功導(dǎo)入抗蟲基因的植物細(xì)胞，觀察到的細(xì)胞生長的現(xiàn)象是在含卡那霉素的培養(yǎng)基中能夠生長，而在含四環(huán)素的培養(yǎng)基中不能生長．
（3）若限制酶Ⅰ切割DNA分子后形成的黏性末端為序列，則該酶識(shí)別的核苷酸序列是．
（4）過程③可以采用的方法是花粉管通道法．
（5）為了檢測(cè)通過過程④獲得的幼苗是否具有抗除草劑的特性，可采用的方法是對(duì)幼苗噴施除草劑，觀察其生長情況．

Answer 1

分析 分析題圖：
圖1是利用質(zhì)粒進(jìn)行轉(zhuǎn)化獲得抗除草劑大豆的過程．①是從細(xì)菌細(xì)胞中獲取質(zhì)粒的過程；②表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建過程；③是將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞的過程；④是將受體細(xì)胞培養(yǎng)成大豆植株的過程，該過程需要采用植物組織培養(yǎng)技術(shù)．
圖2質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)圖，有限制酶切點(diǎn)、復(fù)制原點(diǎn)、標(biāo)記基因等組成成分．

解答 解：（1）②為基因表達(dá)載體的構(gòu)建過程，該過程需要DNA連接酶將質(zhì)粒與目的基因連接形成重組質(zhì)粒．
（2）①基因表達(dá)載體（重組質(zhì)粒）的組成：目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因，圖中缺少啟動(dòng)子．
②限制酶Ⅰ分別切割經(jīng)過②過程改造的理想質(zhì)粒，則沒有（破壞了）抗四環(huán)素的標(biāo)記基因，所以在含四環(huán)素和卡那霉素的培養(yǎng)基培養(yǎng)后，在含四環(huán)素的培養(yǎng)基中不能生長．在含卡那霉素的培養(yǎng)基能夠生長．
（3）若限制酶Ⅰ切割DNA分子后形成的黏性末端為序列，則該酶識(shí)別的核苷酸序列是．
（4）③是將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞的過程，當(dāng)受體細(xì)胞是植物細(xì)胞時(shí)，可采用花粉管通道法（或農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，或基因槍法）．
（5）可以從個(gè)體水平上鑒定通過④過程獲得的幼苗是否具有抗除草劑的特性，具體做法是：對(duì)幼苗噴施除草劑，觀察其生長情況．
故答案為：
（1）DNA連接酶
（2）①啟動(dòng)子�、谠诤�卡那霉素的培養(yǎng)基中能夠生長，而在含四環(huán)素的培養(yǎng)基中不能生長
（3）
（4）花粉管通道法（或農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法，答一項(xiàng)即可）
（5）對(duì)幼苗噴施除草劑，觀察其生長情況

點(diǎn)評(píng) 本題結(jié)合抗除草劑大豆的培育過程圖，考查基因工程的原理及技術(shù)、植物組織培養(yǎng)，要求考生識(shí)記基因工程的操作工具及各工具的作用，識(shí)記基因工程的操作步驟及各步驟采用的方法；識(shí)記植物組織培養(yǎng)原理、過程及應(yīng)用，能結(jié)合題圖答題．