Question

8．隨著社會的發(fā)展，石油產(chǎn)品的使用越來越多，石油烴污染也越來越嚴(yán)重．為了篩選出分解石油烴能力強的微生物，人們不斷地進(jìn)行研究．如圖為獲取能分離出分解石油烴的微生物的土壤樣品后的研究過程，請回答有關(guān)問題：

（1）獲取土壤樣品的取樣地點最好選在石油烴污染明顯處．為了能有效地分離出分解石油烴的微生物，過程①④所用的選擇培養(yǎng)基只能以石油烴作為唯一碳源，其原因是只有能利用石油烴的微生物能正常生長繁殖．
（2）根據(jù)⑤平板上生長的菌落，對④進(jìn)行接種采用的方法是涂布分離，若發(fā)現(xiàn)在⑤中無法區(qū)分菌落，可以將圖中③取出的菌液進(jìn)行（梯度）稀釋．
（3）純化菌株時，通常使用的劃線工具是接種環(huán)．采用灼燒方法對其進(jìn)行滅菌．劃線的某個平板培養(yǎng)后，第一劃線區(qū)域的劃線上都不間斷地長滿了菌落，第二劃線區(qū)域所劃的第一條線上無菌落，其他劃線上有菌落．造成劃線無菌落可能的操作失誤是接種環(huán)灼燒后未冷卻；劃線未從第一區(qū)域末端開始劃線（寫出一點即可）．

Answer 1

分析 （1）培養(yǎng)基的營養(yǎng)構(gòu)成：各種培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源和無機鹽．培養(yǎng)基的分類：①按物理性質(zhì)分，分為液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基，固體培養(yǎng)基中含有凝固劑，一般是瓊脂．②按化學(xué)成分分，分為天然培養(yǎng)基和合成培養(yǎng)．兩者的區(qū)別是天然培養(yǎng)基成分不確定，合成培養(yǎng)基成分的含量是確定的．③按用途分，分為選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基．選擇培養(yǎng)基主要是培養(yǎng)、分離特定的微生物，培養(yǎng)酵母菌可在培養(yǎng)基中加入青霉素；鑒別培養(yǎng)基可以鑒定不同的微生物，比如鑒別飲用水中是否含有大腸桿菌，可以用伊紅-美藍(lán)培養(yǎng)基，如果菌落呈深紫色，并帶有金屬光澤，說明有大腸桿菌．
（2）常用滅菌方法：灼燒滅菌、干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌法．
培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、接種環(huán)、實驗操作者的雙手、空氣、牛奶所采用的滅菌和消毒方法依次：高壓蒸汽滅菌、干熱滅菌、灼燒滅菌、化學(xué)消毒、紫外線滅菌、巴氏消毒法．
（3）接種最常用的方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法．接種的目的是使聚集在一起的微生物分散成單個細(xì)胞，并在培養(yǎng)基表面形成單個細(xì)菌繁殖而成的子細(xì)胞群體--菌落．

解答 解：（1）要獲取相應(yīng)的菌種，應(yīng)到相應(yīng)的環(huán)境中獲取，獲取土壤樣品的取樣地點最好選在石油污染明顯處．有些培養(yǎng)基可以抑制其他微生物的生長，這樣的培養(yǎng)基可稱做選擇培養(yǎng)基．因此，為了能有效地分離出分解石油烴的微生物，過程①一④所用培養(yǎng)基，其成分的特點是只含石油烴一種碳源，從而有利于目的菌的生長，抑制其他微生物的生長．
（2）④中的培養(yǎng)基從物理特征看屬于固體培養(yǎng)基，可加入凝固劑瓊脂處理，常用的接種方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法．根據(jù)⑤平板上生長的菌落，對④進(jìn)行接種采用的方法是涂布分離．若⑤中發(fā)現(xiàn)無法區(qū)分菌落，說明稀釋度不夠，可以將重新進(jìn)行梯度稀釋．
（3）純化菌株時，通常使用的劃線工具是接種環(huán)．采用灼燒方法對其進(jìn)行滅菌．劃線的某個平板培養(yǎng)后，第一劃線區(qū)域的劃線上都不間斷地長滿了菌落，第二劃線區(qū)域所劃的第一條線上無菌落，其他劃線上有菌落．造成劃線無菌落可能的操作失誤是接種環(huán)灼燒后未冷卻；劃線未從第一區(qū)域末端開始劃線．
故答案為：
（1）石油烴污染明顯處     只有能利用石油烴的微生物能正常生長繁殖
（2）涂布分離    進(jìn)行（梯度）稀釋
（3）接種環(huán)    灼燒   接種環(huán)灼燒后未冷卻；劃線未從第一區(qū)域末端開始劃線

點評 本題的知識點是微生物培養(yǎng)過程中的無菌技術(shù)，分離微生物的常用的接種方法和接種工具，主要考生能理解所學(xué)知識的要點，把握知識間的內(nèi)在聯(lián)系的能力．