Question

12．中國科學家成功將肝再生增強因子（hALR）的基因導入羊的乳腺上皮細胞中，再利用核移植技術培育出了轉基因克隆羊，其乳汁含有hALR．回答下列問題：
（1）在體外，可通過PCR技術擴增hALR基因，該技術依據(jù)的原理是DNA雙鏈復制．為了保證PCR反應的進行，反應體系需要加入耐高溫Taq（DNA聚合）酶、模板DNA、dCTP、dATP、dGTP、dTTP、引物等．
（2）將外源hALR基因導入乳腺上皮細胞常用的方法是顯微注射法，檢測其染色體上是否整合了hALR基因，可采用DNA分子雜交技術；將乳腺上皮細胞的細胞核移植到受體卵母細胞之前，對受體卵母細胞的處理是培養(yǎng)至MⅡ中期并去核．
（3）與轉基因工程菌（大腸桿菌）相比，利用羊乳腺生產出的hALR有生物活性，其原因可能是hALR合成后需要經過內質網、高爾基體的加工才具備生物活性．

Answer 1

分析 基因工程技術的基本步驟：
1、目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成．
2、基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等．
3、將目的基因導入受體細胞：根據(jù)受體細胞不同，導入的方法也不一樣．將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法．
4、目的基因的檢測與鑒定：
（1）分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術．
（2）個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）PCR技術依據(jù)的原理是DNA雙鏈復制．為了保證PCR反應的進行，反應體系需要加入耐高溫Taq（DNA聚合）酶、模板DNA、dCTP、dATP、dGTP、dTTP、引物等．
（2）將外源hALR基因導入乳腺上皮細胞常用的方法是顯微注射法，檢測其染色體上是否整合了hALR基因，可采用DNA分子雜交技術；將乳腺上皮細胞的細胞核移植到受體卵母細胞之前，受體卵母細胞需要培養(yǎng)至減數(shù)第二次分裂中期，并且需要去核．
（3）原核細胞只有核糖體，沒有其它細胞器，因此與轉基因工程菌（大腸桿菌）相比，利用羊乳腺生產出的hALR有生物活性，原因是hALR合成后需要經過內質網、高爾基體的加工才具備生物活性．
故答案為：
（1）DNA雙鏈復制       Taq（DNA聚合）       引物
（2）顯微注射法    DNA分子雜交     培養(yǎng)至MⅡ中期并去核
（3）hALR合成后需要經過內質網、高爾基體的加工才具備生物活性

點評 本題考查基因工程、細胞核移植、原核細胞和真核細胞的異同點等知識，要求考生識記基因工程的工具及操作步驟；識記原核細胞和真核細胞在細胞結構上的區(qū)別．