Question

11．研究人員將人工絲蛋白基因?qū)�入到蠶卵內(nèi)，對(duì)蠶卵的基因改造獲得成功．含有人工絲蛋白的蠶繭發(fā)出綠色熒光，比正常的蠶繭更加輕�。�請(qǐng)回答下列問題：
（1）進(jìn)行轉(zhuǎn)基因操作前，需用胰蛋白（或膠原蛋白）酶短時(shí)處理幼蠶組織，以便獲得單個(gè)細(xì)胞．將人工絲蛋白基因?qū)�入到蠶卵體內(nèi)，常用的方法是顯微注射法．
（2）綠色熒光蛋白基因可以作為標(biāo)記基因，用于鑒別和篩選蠶卵中是否含有人工絲蛋白基因．
（3）采用PCR技術(shù)可驗(yàn)證干擾素基因是否已經(jīng)導(dǎo)人家蠶細(xì)胞．PCR技術(shù)利用的原理是DNA雙鏈復(fù)制，該P(yáng)CR 反應(yīng)體系的主要成分應(yīng)該包含擴(kuò)增緩沖液（含Mg²⁺）、水、4種脫氧核苷酸、模板DNA、Taq酶（或耐高溫的DNA聚合酶）和引物．
（4）生物反應(yīng)器培養(yǎng)家香細(xì)胞時(shí)會(huì)產(chǎn)生接觸抑制，所以培養(yǎng)時(shí)通常將多孔的中空薄壁小玻璃珠放入反應(yīng)器 中，這樣可以通過增大細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)的附著面積來增加培養(yǎng)的細(xì)胞數(shù)量，也有利于空氣交換．

Answer 1

分析 1、基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫(kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成．
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等．
（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法．
（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．
2、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程：取動(dòng)物組織塊→剪碎組織→用胰蛋白酶處理分散成單個(gè)細(xì)胞→制成細(xì)胞懸液→轉(zhuǎn)入培養(yǎng)液中（原代培養(yǎng)）→放入二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)→貼滿瓶壁的細(xì)胞用酶分散為單個(gè)細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液→轉(zhuǎn)入培養(yǎng)液（傳代培養(yǎng)）→放入二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)．

解答 解：（1）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，首先需要用胰蛋白酶（或膠原蛋白酶）處理幼蠶組織，以便獲得單個(gè)細(xì)胞．將目的基因（人工絲蛋白基因）導(dǎo)入動(dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法．
（2）綠色熒光蛋白基因可以作為標(biāo)記基因，用于鑒別和篩選蠶卵中是否含有人工絲蛋白基因．
（3）PCR技術(shù)的原理是DNA雙鏈復(fù)制；PCR反應(yīng)體系的主要成分應(yīng)該包含擴(kuò)增緩沖液（含Mg²⁺）、水、4種脫氧核苷酸、模板DNA、Taq酶（或耐高溫的DNA聚合酶） 和一對(duì)引物．
（4）生物反應(yīng)器培養(yǎng)家香細(xì)胞時(shí)會(huì)產(chǎn)生接觸抑制，所以培養(yǎng)時(shí)通常將多孔的中空薄壁小玻璃珠放入反應(yīng)器 中，這樣可以通過增大細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)的附著面積來增加培養(yǎng)的細(xì)胞數(shù)量，也有利于空氣交換．
故答案為：
（1）胰蛋白（或膠原蛋白）    顯微注射法
（2）標(biāo)記基因
（3）DNA雙鏈復(fù)制      Taq酶（或耐高溫的DNA聚合酶）     引物
（4）增大細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)的附著面積

點(diǎn)評(píng) 本題考查基因工程和細(xì)胞工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的原理及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細(xì)節(jié)；識(shí)記動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過程及條件，能結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確答題．