Question

18．炭疽桿菌能引起人畜患炭疽病．炭疽桿菌兩端截平、呈竹節(jié)狀排列，菌落呈卷發(fā)狀．對炭疽病疑似患者，可根據(jù)噬菌體的寄主專一性，通過實驗進(jìn)行確診．
細(xì)菌培養(yǎng)：采集疑似患者的樣本，分離培養(yǎng)，獲得可疑菌落．
細(xì)菌鑒定：實驗流程圖如圖所示．

（1）對配制的液體培養(yǎng)基要采用髙壓蒸汽方法滅菌．培養(yǎng)基配制和滅菌時，滅菌與凋節(jié)pH的先后順序是先調(diào)節(jié)pH，后滅菌．
（2）挑選可疑菌后進(jìn)行接種時，放在35℃條件下培養(yǎng)24小時，液體培養(yǎng)基變渾濁，原因是細(xì)菌大量繁殖．圖中的對照組試管中應(yīng)加入等量生理鹽水．
（3）圖中兩組試管同時培養(yǎng)6小時后，進(jìn)行比較，若實驗組液體培養(yǎng)基的渾濁度降低（填“提高”、“降低”、“不變”），則可明確疑似患者被炭疽桿菌感染．此實驗依據(jù)的原理是實驗組中的噬菌體能特異性地侵染炭疽桿菌，使細(xì)菌死亡，溶液變澄淸．
（4）在對微生物進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)過程中需要對微生物進(jìn)行計數(shù)．取0.2mL樣品，用固體培養(yǎng)基對其培養(yǎng)，最后統(tǒng)計三個平板，菌落數(shù)分別是200、180、220．則樣品中微生物的數(shù)量為1000個/mL．該統(tǒng)計結(jié)果低于（填“低于”、“髙于”）實際值．

Answer 1

分析 1、培養(yǎng)基的基本成分：水、無機(jī)鹽、碳源、氮源及特殊生長因子；
2、無菌操作，包括滅菌和消毒兩種方式，消毒的方法有巴氏消毒法、酒精消毒、煮沸消毒法；滅菌的方法有干熱滅菌、灼燒滅菌和高壓蒸汽滅菌；
3、微生物的接種：微生物接種的方法很多，最常用的是平板劃線法和稀釋涂布平板法，常用來統(tǒng)計樣品活菌數(shù)目的方法是稀釋涂布平板法．
4、微生物實驗室分離中配制培養(yǎng)基的操作步驟：計算→稱量→溶解→調(diào)pH→滅菌步驟．

解答 解：（1）對培養(yǎng)基滅菌常用高壓蒸汽滅菌法；培養(yǎng)基的制備步驟為：計算、稱量、溶化、調(diào)pH、滅菌和倒平板．
（2～3）接種可疑菌后，35℃培養(yǎng)24小時，細(xì)菌大量繁殖，液體培養(yǎng)基變渾濁．對照組試管中應(yīng)加入等量生理鹽水．與實驗組同時培養(yǎng)6小時后，由于實驗組中的噬菌體能特異性地侵染炭疽桿菌，使細(xì)菌死亡，溶液變澄淸，因此若實驗組液體培養(yǎng)基的渾濁度比對照組低，則可明確疑似患者被炭疽桿菌感染；反之則排除．
（4）在對微生物進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)過程中需要對微生物進(jìn)行計數(shù)．取0.2mL樣品，用固體培養(yǎng)基對其培養(yǎng)，最后統(tǒng)計三個平板，菌落數(shù)分別是200、180、220．則樣品中微生物的數(shù)量為$\frac{200+180+220}{3}$×$\frac{1}{0.2}$=1000個/mL．由于兩個或多個細(xì)胞連在一起時，在培養(yǎng)基上只能觀察到一個菌落，因此該統(tǒng)計結(jié)果低于實際值．
故答案為：
（1）髙壓蒸汽       先調(diào)節(jié)pH，后滅菌
（2）細(xì)菌大量繁殖         等量生理鹽水
（3）降低    實驗組中的噬菌體能特異性地侵染炭疽桿菌，使細(xì)菌死亡，溶液變澄淸
（4）1000      低于

點評 本題考查微生物的分離和培養(yǎng)，要求考生識記培養(yǎng)基的種類及功能，掌握培養(yǎng)基的制備過程；識記幾種微生物常用的兩種方法，能結(jié)合所學(xué)的知識準(zhǔn)確答題．