Question

5．下面是以小鼠為對(duì)象進(jìn)行的各項(xiàng)研究工作，請(qǐng)分析回答問題．
（1）在小鼠細(xì)胞培養(yǎng)過程中，當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長到細(xì)胞表面相互接觸時(shí)，細(xì)胞會(huì)停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞的接觸抑制．此時(shí)，瓶壁上形成細(xì)胞層數(shù)是1層．通常將多孔的中空薄壁小玻璃珠放入培養(yǎng)瓶中可以擴(kuò)大細(xì)胞貼壁生長的附著面積，增加培養(yǎng)的細(xì)胞數(shù)量，也有利于空氣交換．用有關(guān)的酶使貼壁的細(xì)胞從瓶壁上分離下來，重新配置細(xì)胞懸液后進(jìn)行分瓶培養(yǎng)，稱為傳代培養(yǎng)．
（2）如果體外受精后，在精核與卵核融合之前，用微型吸管除雄核，再用細(xì)胞松弛素B處理（作類似于用秋水仙素處理植物細(xì)胞），處理后的受精卵可發(fā)育成小鼠．這種方法在動(dòng)物新品種選育中的顯著優(yōu)點(diǎn)是容易獲得純合子，縮短育種的年限
（3）細(xì)胞培養(yǎng)過程要求的環(huán)境是無菌、無毒，在細(xì)胞培養(yǎng)液中添加一定的抗生素，防止培養(yǎng)過程中的污染，此外還要定期更換培養(yǎng)液，以便清除代謝產(chǎn)物，防止細(xì)胞代謝產(chǎn)物積累對(duì)細(xì)胞自身造成危害．
（4）在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，通常在-196℃液氮條件下保存細(xì)胞，因?yàn)樵谶@種條件下，細(xì)胞中酶的活性降低，細(xì)胞的代謝速率降低．

Answer 1

分析 1、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的流程：取動(dòng)物組織塊（動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的器官或組織）→剪碎→用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理分散成單個(gè)細(xì)胞→制成細(xì)胞懸液→轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶中進(jìn)行原代培養(yǎng)→貼滿瓶壁的細(xì)胞重新用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理分散成單個(gè)細(xì)胞繼續(xù)傳代培養(yǎng)．
2、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)需要滿足以下條件：①無菌、無毒的環(huán)境；②營養(yǎng)；③溫度和pH；④氣體環(huán)境：95%空氣+5%CO₂．
3、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用：制備病毒疫苗、制備單克隆抗體、檢測有毒物質(zhì)、培養(yǎng)醫(yī)學(xué)研究的各種細(xì)胞．

解答 解：（1）在小鼠細(xì)胞培養(yǎng)過程中，當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長到細(xì)胞表面相互接觸時(shí)，細(xì)胞會(huì)停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞的接觸抑制．此時(shí)，瓶壁上形成細(xì)胞層數(shù)是1層．通常將多孔的中空薄壁小玻璃珠放入培養(yǎng)瓶中可以擴(kuò)大細(xì)胞貼壁生長的附著面積，增加培養(yǎng)的細(xì)胞數(shù)量，也有利于空氣交換．用有關(guān)的酶使貼壁的細(xì)胞從瓶壁上分離下來，重新配置細(xì)胞懸液后進(jìn)行分瓶培養(yǎng)，稱為傳代培養(yǎng)．
（2）如果體外受精后，在精核與卵核融合之前，用微型吸管除雄核，再用細(xì)胞松弛素B處理（作類似于用秋水仙素處理植物細(xì)胞），處理后的受精卵可發(fā)育成小鼠．這種方法在動(dòng)物新品種選育中的顯著優(yōu)點(diǎn)是容易獲得純合子，縮短育種的年限．
（3）細(xì)胞培養(yǎng)過程要求的環(huán)境是無菌、無毒，在細(xì)胞培養(yǎng)液中添加一定的抗生素，防止培養(yǎng)過程中的污染，此外還要定期更換培養(yǎng)液，以便清除代謝產(chǎn)物，防止細(xì)胞代謝產(chǎn)物積累對(duì)細(xì)胞自身造成危害．
（4）在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，通常在-196℃液氮條件下保存細(xì)胞，因?yàn)樵谶@種條件下，細(xì)胞中酶的活性降低，細(xì)胞的代謝速率降低．
故答案為：
（1）接觸抑制    1層     擴(kuò)大細(xì)胞貼壁生長的附著面積     傳代培養(yǎng)
（2）容易獲得純合子，縮短育種的年限
（3）無菌、無毒       抗生素      更換培養(yǎng)液
（4）-196℃液氮

點(diǎn)評(píng) 本題主要考查學(xué)生對(duì)知識(shí)的理解和分析能力．動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基是液體培養(yǎng)基，其中通常含有葡萄糖、氨基酸、無機(jī)鹽、維生素和動(dòng)物血清等．植物組織培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基是固體培養(yǎng)基，其中通常含有蔗糖、氨基酸、無機(jī)鹽和植物激素等．在利用動(dòng)物組織細(xì)胞制備一定濃度的細(xì)胞懸液時(shí)常用胰蛋白酶，不能使用胃蛋白酶，因?yàn)槲傅鞍酌感枰�在�?qiáng)酸環(huán)境下才能起作用，但這樣的環(huán)境不適于細(xì)胞生存．