Question

6．如表是幾種限制梅識(shí)別序列及其切割位點(diǎn)，（圖1、圖2中標(biāo)注了相關(guān)限制酶的酶切位點(diǎn)，其中側(cè)位點(diǎn)先同的酶不重復(fù)標(biāo)注．請(qǐng)回答下列問題：

限制酶	BamHI	BclI	Sau3A I	HindIII
識(shí)別序列及切割位點(diǎn)	G1GATC C C CTAG1G	T1GATC A A CTAG1T	1GATC CTAG1	A1AGCT T T TCGA1A

（1）圖1中啟動(dòng)子是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位．氨芐青霉素抗性基因和四環(huán)素抗性基因作為標(biāo)記基因，其作用是鑒別受體細(xì)胞中是否含有目的基因（以便篩選出含有目的基因的細(xì)胞）．
（2）用圖中質(zhì)粒和目的基因構(gòu)建重組DNA，應(yīng)選用BclI和HindIII兩種限制酶切割，酶切后的載體和目的基因片段，通過DNA連接酶作用后獲得重組質(zhì)粒．將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌時(shí)，先用Ca²⁺（或CaCl₂）處理細(xì)胞，使其處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的感受態(tài)細(xì)胞．
（3）一個(gè)基因表達(dá)載體的組成，除了圖1中質(zhì)粒所示結(jié)構(gòu)外，還應(yīng)具有終止子和目的基因．
（4）為了篩選出轉(zhuǎn)入重組質(zhì)粒的大腸桿菌，應(yīng)在選擇培養(yǎng)基中添加四環(huán)素．若用Sau3k I切圖質(zhì)粒最多可能獲得7種大小不同的DNA片段．

Answer 1

分析 分析圖1：外源DNA上含有限制酶BclI、BamHⅠ、HindIII和Sau3A I的切割位點(diǎn)，其中限制酶BclI、BamHⅠ、HindIII的識(shí)別序列都能被Sau3k I識(shí)別．
分析圖2：質(zhì)粒上有限制酶BclI、BamHⅠ、HindIII三種限制酶的識(shí)別序列和切割位點(diǎn)，其中BamHⅠ的切割位點(diǎn)位于兩種抗生素抗性基因上．

解答 解：（1）啟動(dòng)子是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位．標(biāo)記基因的作用是鑒別受體細(xì)胞中是否含有目的基因（以便篩選出含有目的基因的細(xì)胞）．
（2）目的基因兩側(cè)有限制酶BclI、BamHⅠ、HindIII和Sau3A I的切割位點(diǎn)，若用限制酶BamHⅠ或Sau3A I切割會(huì)破壞質(zhì)粒上兩種抗性基因，因此用圖中質(zhì)粒和目的基因構(gòu)建重組DNA時(shí)，應(yīng)選用BclI和HindIII兩種限制酶切割，酶切后的載體和目的基因片段，通過DNA連接酶作用后獲得重組質(zhì)粒．將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞時(shí)常有感受態(tài)細(xì)胞法，即先用Ca²⁺（或CaCl₂）處理細(xì)胞，使其處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的感受態(tài)細(xì)胞．
（3）基因表達(dá)載體的組成除了圖中的啟動(dòng)子、標(biāo)記基因（抗生素抗性基因）外，還有終止子和目的基因．
（4）由于選用BclI和HindIII兩種限制酶構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，破壞了氨芐青霉素抗性基因，但沒有破壞四環(huán)素抗性基因，因此切割構(gòu)建為了篩選出轉(zhuǎn)入重組質(zhì)粒的大腸桿菌，應(yīng)在選擇培養(yǎng)基中添加四環(huán)素．由于限制酶BclI、BamHⅠ、HindIII的識(shí)別序列都能被Sau3k I識(shí)別，因此用Sau3k I切圖質(zhì)粒最多可能獲得7種大小不同的DNA片段．
故答案為：
（1）RNA聚合酶      鑒別受體細(xì)胞中是否含有目的基因（以便篩選出含有目的基因的細(xì)胞）
（2）BclI和HindIII      DNA連接酶         Ca²⁺（或CaCl₂）
（3）終止子     
（4）四環(huán)素      7

點(diǎn)評(píng) 本題結(jié)合基因結(jié)構(gòu)圖和運(yùn)載體結(jié)構(gòu)圖，考查基因工程的技術(shù)和原理，重點(diǎn)是限制酶和DNA連接酶，要求考生認(rèn)真分析圖1和圖2，能根據(jù)圖中和表中信息選擇合適的限制酶，準(zhǔn)確判斷使用DNA連接酶連接的結(jié)果，再運(yùn)用所學(xué)的知識(shí)答題．