Question

14．圖1為單克隆抗體制備流程示意圖，圖2為生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌抗體的實(shí)驗(yàn)方案．請(qǐng)據(jù)圖回答問(wèn)題．

（1）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是單克隆抗體技術(shù)的基礎(chǔ)．通常在合成培養(yǎng)基中加入適量血清，其原因是血清可以補(bǔ)充合成培養(yǎng)基中缺乏的物質(zhì)．細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)在含5%CO₂的恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行，CO₂的作用是維持培養(yǎng)液pH．
（2）圖1中細(xì)胞融合是隨機(jī)的過(guò)程，在HAT培養(yǎng)基中培養(yǎng)，目的是篩選雜交瘤細(xì)胞．
（3）圖1中為選育出能產(chǎn)生高特異性抗體的細(xì)胞，要將從HAT培養(yǎng)基上篩選出的細(xì)胞稀釋到7-10個(gè)細(xì)胞/mL，每孔滴入0.1mL細(xì)胞稀釋液，其目的是使每個(gè)小孔內(nèi)不多于一個(gè)細(xì)胞，達(dá)到制備單克隆培養(yǎng)的目的．
（4）圖2中②過(guò)程，常用滅活的病毒作為誘導(dǎo)劑．選出的細(xì)胞具備無(wú)限增殖、能分泌特異性抗體特點(diǎn)．
（5）圖2該方案能達(dá)到預(yù)期效果嗎？不能．原因是沒(méi)有將抗原注入小鼠體內(nèi)，無(wú)法獲得產(chǎn)生單一抗體的B淋巴細(xì)胞．
（6）已知癌細(xì)胞X基因過(guò)量表達(dá)與肝腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)，要試驗(yàn)一種抗腫瘤藥物Y對(duì)癌細(xì)胞X基因表達(dá)量的影響，可將甲細(xì)胞分為甲、乙兩組，甲組細(xì)胞培養(yǎng)液中加入等量的藥物Y，乙組細(xì)胞培養(yǎng)液中加入無(wú)菌生理鹽水，經(jīng)培養(yǎng)后，從甲、乙兩組收集等量細(xì)胞，通過(guò)分別檢測(cè)X基因在甲、乙兩組細(xì)胞中的mRNA或蛋白質(zhì)合成水平的差異，確定Y的藥效．

Answer 1

分析 據(jù)圖1分析，將特定的抗原注射小鼠，篩選出產(chǎn)生抗體的淋巴細(xì)胞；與骨髓瘤細(xì)胞融合，轉(zhuǎn)移到HAT培養(yǎng)基中培養(yǎng)，未融合的細(xì)胞死亡，而雜交瘤細(xì)胞存活；雜交瘤細(xì)胞分開(kāi)培養(yǎng)，選育出產(chǎn)生高特異性抗體的細(xì)胞．
據(jù)圖2分析，①過(guò)程獲取B淋巴細(xì)胞；②過(guò)程是誘導(dǎo)細(xì)胞融合，篩選出雜交瘤細(xì)胞；③過(guò)程是細(xì)胞培養(yǎng)，④過(guò)程篩選能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞，⑤過(guò)程是通過(guò)小鼠腹腔中培養(yǎng)獲得大量的單克隆抗體或培養(yǎng)液中培養(yǎng)獲得大量的單克隆抗體．

解答 解：（1））動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是單克隆抗體技術(shù)的基礎(chǔ)．通常在合成培養(yǎng)基中加入適量血清，原因是血清可以補(bǔ)充合成培養(yǎng)基中缺乏的物質(zhì)，細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)在含5%CO₂的恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行，CO₂的作用是維持培養(yǎng)液pH．
（2）據(jù)圖分析，骨髓瘤細(xì)胞在HAT培養(yǎng)基上無(wú)法生長(zhǎng)，所以骨髓瘤細(xì)胞之間形成的融合細(xì)胞也不能在該培養(yǎng)基上存活；淋巴細(xì)胞和淋巴細(xì)胞自身融合的細(xì)胞能在HAT培養(yǎng)基上正常生活，但不能增殖，所以經(jīng)過(guò)培養(yǎng)后，HAT培養(yǎng)基上沒(méi)有淋巴細(xì)胞和淋巴細(xì)胞自身融合的細(xì)胞；骨髓瘤細(xì)胞與淋巴細(xì)胞之間形成的雜交瘤細(xì)胞能在HAT培養(yǎng)基上正常生活，并無(wú)限增殖．故HAT培養(yǎng)基培養(yǎng)目的是：篩選雜交瘤細(xì)胞．
（3）為選育出能產(chǎn)生高特異性抗體的細(xì)胞，要將從HAT培養(yǎng)基上篩選出的細(xì)胞稀釋到7～10個(gè)細(xì)胞/ml，每孔滴入0.1ml細(xì)胞稀釋液，其目的是使每個(gè)孔內(nèi)不多于一個(gè)細(xì)胞，達(dá)到單克隆培養(yǎng)的目的（或單一細(xì)胞培養(yǎng)以保證抗體的純度）．
（4）植物細(xì)胞原生質(zhì)體融合常用物理法和化學(xué)法誘導(dǎo)劑，動(dòng)物細(xì)胞融合還可以采用滅活的病毒．選出的細(xì)胞具備無(wú)限增殖、能分泌特異性抗體的特點(diǎn)．
（5）圖2 方案沒(méi)有將抗原注入小鼠體內(nèi)，無(wú)法獲得產(chǎn)生單一抗體的B淋巴細(xì)胞．
（6）該實(shí)驗(yàn)的目的是試驗(yàn)一種抗腫瘤藥物Y對(duì)甲細(xì)胞生長(zhǎng)的影響，因此自變量為是否加入Y，乙組細(xì)胞培養(yǎng)液中加入等量無(wú)菌生理鹽水，則甲組細(xì)胞培養(yǎng)液中應(yīng)加入等量Y．已知基因X表達(dá)與肝腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)，而基因X的表達(dá)包括轉(zhuǎn)錄和翻譯兩個(gè)步驟，抗癌藥物Y的作用可能是抑制基因X的轉(zhuǎn)錄過(guò)程，也可能是抑制其翻譯過(guò)程，因此通過(guò)分別檢測(cè)基因X在甲、乙兩組細(xì)胞中的mRNA或相關(guān)蛋白質(zhì)合成水平的差異，可以確定Y的藥效．
故答案為：
（1）血清可以補(bǔ)充合成培養(yǎng)基中缺乏的物質(zhì)   維持培養(yǎng)液pH
（2）篩選雜交瘤細(xì)胞
（3）使每個(gè)小孔內(nèi)不多于一個(gè)細(xì)胞，達(dá)到制備單克隆培養(yǎng)的目的（或單一細(xì)胞培養(yǎng)以保證抗體純度）
（4）滅活的病毒      無(wú)限增殖、能分泌特異性抗體
（5）不能  沒(méi)有將抗原注入小鼠體內(nèi)，無(wú)法獲得產(chǎn)生單一抗體的B淋巴細(xì)胞
（6）等量的藥物Y        mRNA       蛋白質(zhì)

點(diǎn)評(píng) 本題以單克隆抗體制備流程階段示意圖為載體，考查單克隆抗體制備的過(guò)程，動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件，意在考查考生的識(shí)記能力和理解所學(xué)知識(shí)要點(diǎn)，把握知識(shí)間內(nèi)在聯(lián)系的能力；能運(yùn)用所學(xué)知識(shí)，對(duì)生物學(xué)問(wèn)題作出準(zhǔn)確的判斷，難度適中．